Клеточная биотехнология
Маточные растворы макросолей обычно превосходят рабочие по концентрации в 10-40 раз, микросолей – в 100-1000 раз, витаминов – в 1000 раз.
Растворы фитогормонов желательно готовить непосредственно перед работой со средами.
Для приготовления маточного раствора макро- и микросолей каждую соль растворяют в отдельном стаканчике при нагревании, затем сливают и доводят до нужного объема. В охлажденную смесь микросолей последним добавляют раствор солей молибдена, а в макросоли – раствор солей магния (для предотвращения выпадения осадка).
Маточные растворы хлористого кальция и хелата железа (сернокислое железо + ЭДТА, либо Na ЭДТА – трилон Б) готовят и хранят отдельно от других солей.
Концентрированные растворы витаминов готовят следующим образом: 10-кратные навески растворяют в 10 мл дистиллированной воды каждый отдельно.
Фитогормоны – это вещества, которые плохо растворяются в воде. Поэтому предварительно 100 мг вещества растворяют в небольших количествах (0,5-2,0 мл) спирта (ауксины, гиббереллины), 0,5-1н HCl или КОН (цитокинины), затем подогревают до полного растворения (кроме абсцизовой кислоты и кинетина) и доводят до 100 мл объема (1 мл содержит 1 мг вещества).
В таблице представлен состав наиболее часто используемых питательных сред. Как правило, начиная работать с новым объектом, исследователи модифицируют состав стандартных сред, особенно часто варьируя концентрации и набор органических компонентов.
Частные примеры питательных сред.
Приготовление маточных растворов для среды Мурасиге-Скуга.
|
№ п.п. |
Компонент среды |
Количество вещества |
|
Маточный раствор макросолей (г на 1 л маточного раствора) | ||
|
1. 2. 3. 4. |
KNO3 NH4NО3 KH2PO4 MgSO4 . 7H2O или MgSO4 безводный |
38 33 3,4 7,4 3,6 |
|
5. |
CaCl2 . 2H2O или CaCl2 безводный |
8,8 6,65 |
|
Маточный раствор микросолей (мг на 100 мл маточного раствора) | ||
|
6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. |
Na2MoO4 . 2H2O CuSO4 . 5H2O H3BO3 MnSO4 . 5H2O или MnSO4 . 4H2O ZnSO4 . 7H2O KJ CoCl2 . 6H2O |
25 2,5 620 2410 2230 860 83 2,5 |
|
13. |
FeSO4 Na2 ЭДТА |
557 745 |
Среда Мурасиге-Скуга (М-С) для клеточных и тканевых культур
|
Компоненты питательной среды | |
|
Маточный раствор макросолей Маточный раствор микросолей Fe-хеллат CaCl2 Тиамин-HCl Пиридоксин-HCl Никотиновая кислота Мезоинозит Глицин Сахароза |
50 мл/л 1 мл/л 5 мл/л 50 мл/л 0,1 мг/л 0,5 мг/л 0,5 мг/л 100 мг/л 2 мг/л 30 г/л |
|
рН 5,6-5,8 | |
Модифицированная питательная среда Мурасиге-Скуга для культивирования апикальных меристем картофеля
|
Компоненты питательной среды | |
|
Маточный раствор макросолей Маточный раствор микросолей Fe-хеллат CaCl2 Тиамин-HCl Пиридоксин-HCl Витамин В12 Никотиновая кислота Фолиевая кислота Мезоинозит Гидролизат казеина Аденин Пантотенат Са Рибофлавин Биотин Активированный уголь ГК Кинетин Сахароза Глюкоза Агар-агар |
50 мл/л 1 мл/л 5 мл/л 50 мл/л 1 мг/л 1 мг/л 0,015 мг/л 2 мг/л 0,5 мг/л 100 мг/л 1 г/л 40 мг/л 10 мг/л 0,5 мг/л 1 мг/л 10 г/л 2 мг/л 0,5 мг/л 20 г/л 20 г/л 7 г/л |
|
рН 5,7-5,8 | |
Модифицированная питательная среда Мурасиге-Скуга для микроразмножения картофеля черенкованием побегов
|
Компоненты питательной среды | |
|
Маточный раствор макросолей Маточный раствор микросолей Fe-хеллат CaCl2 Тиамин-HCl Пиридоксин-HCl Никотиновая кислота Аденин Кинетин Гибберелловая кислота Пантотенат Са |
50 мл/л 1 мл/л 5 мл/л 50 мл/л 1 мг/л 1 мг/л 2 мг/л 40 мг/л 0,5 мг/л 2 мг/л 10 мг/л |
|
Активированный уголь Сахароза Агар-агар |
10 г/л 30 г/л 7 г/л |
|
рН 5,8 | |
Приготовление маточных растворов для среды Гамборга-Эвелега.
|
№ п.п. |
Компонент среды |
Количество вещества |
|
Маточный раствор макросолей (г на 1 л маточного раствора) | ||
|
1. 2. 3. 4. |
KNO3 (NH4)2SO4 MgSO4 . 7H2O NaH2PO4 . H2O |
60 2,68 10,0 3,0 |
|
5. |
CaCl2 . 2H2O |
3,0 |
|
Маточный раствор микросолей (мг на 100 мл маточного раствора) | ||
|
6. 7. 8. 9. 10. 11. |
Na2MoO4 . 2H2O CuSO4 . 5H2O H3BO3 MnSO4 . H2O ZnSO4 . 7H2O CoCl2 . 6H2O |
25 7,5 300 1000 200 2,5 |
|
12. |
FeSO4 Na2 ЭДТА |
557 745 |
Среда Гамборга-Эвелега
|
Компоненты питательной среды | |
|
Маточный раствор макросолей Маточный раствор микросолей Fe-хеллат CaCl2 Тиамин-HCl Пиридоксин-HCl Никотиновая кислота Мезоинозит 2,4-Д Сахароза |
50 мл/л 1 мл/л 5 мл/л 50 мл/л 10 мг/л 1 мг/л 1 мг/л 100 мг/л 2 мг/л 20 г/л |
|
рН 5,8 | |
