Очистка экстракта от молочного жира. В нижнюю часть хроматографической колонки помещают стекловату, затем насыпают в колонку 70 мл силикагеля АСК и уплотняют его постукиванием. Колонку промывают 50 мл гексана, а прошедший через нее растворитель отбрасывают. На подготовленную таким образом колонку наносят 30 мл полученного из молока или молочных продуктов экстракта. После впитывания экстракта в сорбент пестицид элюируют 110мл смеси бензола с гексаном (3:8) порциями по 25—30 мл. Элюат собирают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 250—300 мл. Через 10 мин после впитывания последней порции растворителя сорбент отжимают с помощью резиновой груши. После очистки растворители отгоняют под вакуумом.

Хроматографирование. На хроматографическую пластинку на расстоянии 1,5 см от ее края шприцем или пипеткой наносят исследуемую пробу в одну точку так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см.

Остаток экстракта в колбочке смывают тремя небольшими порциями (по 0,2 мл) диэтилового эфира, которые наносят в центр первого пятна. Справа и слева от пробы на расстоянии 2 см наносят стандартные растворы, содержащие 1,5 и 10 мкг исследуемых препаратов. Для нанесения 1 мкг стандартный раствор следует разбавлять в 10 раз.

Пластинку с нанесенными растворами помещают в камеру для хроматографирования, на дно которой за 30 мин до начала хроматографирования наливают подвижный растворитель н-гексан, а для препаратов, у которых Rf в гексане ниже 0,3 — смесь гексана с ацетоном (6:1). Край пластинки с нанесенными растворами может быть погружен в подвижный растворитель не более чем на 0,5 см.

После того как фронт растворителя поднимется на 10 см, пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут для испарения растворителя. Далее пластинку орошают проявляющим реактивом и подвергают УФ-облучению 10—15 мин (лампа ПРК-4). Пластинки следует располагать на расстоянии 20 см от источника света.

При наличии хлорорганических пестицидов на пластинке появляются пятна серо-черного цвета. Количественное определение осуществляют сравнением размеров пятен пробы и стандартного раствора (визуально или измеряют площади). Между количеством препарата в пробе, не превышающем 20 мкг, и площадью его пятна на пластинке существует прямая пропорциональность. При большем содержании препарата следует использовать пропорциональную часть исследуемого экстракта.

Расчет количества препарата в пробе вычисляют по формуле:

X = A / P или

где X — содержание препарата в пробе, мг/кг или мг/л; А — количество препарата, найденное путем визуального сравнения со стандартным раствором, мкг; Р — масса или объем исследуемой пробы, г или мл; А1 – содержание препарата в стандартном растворе, мкг; S1 – площадь пятна стандартного раствора, мм2; S – площадь пятна пробы, мм2.

Величина Rf зависит от адсорбента, размера его частиц, количества и природы связующего материала, толщины слоя, природы подвижного растворителя, степени насыщения камеры для хроматографирования парами подвижного растворителя, расстояния пройденного растворителем, температуры, количества и природы коэкстрактивных веществ.

Для ДДТ Rf для оксида алюминия составляет 0,61-0,71 (в зависимости от изомера) и 0,50-0,54 на силикагеле.

На слое оксида алюминия обнаруживаются три пятна, которые соответствуют 4,4'-ДДТ (основное пятно), 2,4'-ДДТ и 4,4'-ДДД (слабое пятно). Пятно ДДД проявляется, если содержание ДДТ в анализируемой пробе превышает 20 мкг. Содержание изомеров ДДТ суммируют. На хроматограммах проб пищевых продуктов, содержащих остаточные количества ДДТ, кроме упомянутых трех пятен, обнаруживается четвертое пятно, соответствующее продукту разложения ДДТ — ДДЭ.

На слое силикагеля технический препарат ДДТ дает одно пятно, соответствующее сумме изомеров. Если количество ДДТ в пробе превышает 20 мкг, на хроматограмме появляется слабое пятно, соответствующее ДДД. [5]

2.2 Определение о,о-диэтил-8-(6-хлорбензоксазолинил-3-метил)-дитиофосфата (фозалона) в яблоках методом тонкослойной хроматографии

Фозалон применяется для борьбы с вредителями сада. [6]

В литературе описана идентификация фозалона и определение его в растениях колориметрическим и биологическим методами [7].

Однако эти методы весьма громоздки, так как требуют сложной очистки растительных экстрактов. Нами был разработан простой качественный и количественный метод определения остаточных количеств фозалона в яблоках с применением тонкослойной хроматографии. Исходным веществом служил чистый препарат фозалона. Опыты проводили с яблоками сорта Ренет Симиренко.

После испытания ряда экстрагентов для извлечения фозалона из яблок был избран хлороформ. Для идентификации фозалона применили метод тонкослойной хроматографии.

При подборе подвижной фазы был изучен ряд органических растворителей и их смесей. Наилучшей для идентификации фозалона является смесь гексана с ацетоном в соотношении 4:1.

Для проявления фозалона на хроматографических пластинках был испытан ряд реактивов, рекомендованных для проявления фосфорорганических пестицидов [8 – 11].

Наилучшие результаты дали 0,2%-ный раствор хлористого палладия [L. Fishbein, J. Fowkes, P. Jones. J. Chromatogr., 23, 47b (1966).] или смесь 0,05 %-ного раствора бром-фенолового синего в ацетоне с 1%-ным водным раствором AgNО3 в соотношении 1:1, с последующим отбеливанием хроматограмм 2,5%-ным раствором лимонной кислоты [Л. М. Фукельман. Сборник трудов ВИЗР, вып. 20, ч. 4, 61 (1964).]. Эти проявители позволяют обнаруживать до 1 мкг фозалона.

Рис. 5. Тонкослойная хроматограмма фозалона1 из экстракта яблок на силикагеле КСК. а – место нанесения экстракта; б – точка нанесения стандарта; в – место отложения фозалона

Рис. 6. Двухмерная тонкослойная хроматограмма фозалона из экстракта яблок на силикагеле КСК. а — б — место нанесения экстракта с содержанием фозалона 50 мкг; в, г, д – точки нанесения стандартных растворов фозалона, соответственно 25, 50 и 75 мкг.

Предлагаемая методика определения фозалона в яблоках заключается в следующем. 100 г яблок измельчают, наносят пипеткой определенное количество фозалона. Экстрагируют хлороформом при встряхивании на шутель-аппарате 1,5 часа. Хлороформный экстракт отделяют от растительной массы фильтрованием. Растительную массу на фильтре промывают трижды хлороформом (по 20 мл). Фильтрат и промывные порции хлороформа собирают в колбу для отгонки растворителя. Хлороформ отгоняют под вакуумом до объема 5—10 мл. Переносят его количественно в стаканчик, упаривают до 0,5 мл и наносят на пластинку полоской шириной 1 см длиной 5 см на расстоянии 1,5 см от нижнего края пластинки.

Для хроматографирования используют стеклянные пластинки размером 9 X 15 см, на которые наносят тонкий слой силикагеля марки КСК (40 меш), закрепленный гипсом.

Хроматографирование проводят в системе гексан — ацетон (4:1).