Существенным качественным параметром развития эмбриона в культуре является образование бластоцеля. В опыте, где была использована среда с добавлением комплекса антибиотиков гентамицин + ампициллин в концентрациях 12 мкг/мл и 100 Ед/мл, в контроле – среда с антибиотиками пенициллин+стептомицин (100 и 50 Ед/мл), во втором контроле – среда без добавления антибиотиков: 5 из 7 (71,4%), 5 из 9 (55,5%) и 3 из 6 (50%) эмбрионов развились из стадии морулы поздней (МП) в бластоцисту раннюю (БР); 5 из 5 (100%), 5 из 5 (100%), 2 из 5 (40%) эмбрионов развились из стадии бластоцисты ранней (БР) в бластоцисту позднюю (БП); 5 из 7 (71,4%), 5 из 7 (71,4%) и 3 из 4 (75%) эмбрионов развились из стадии бластоцисты поздней (БП) в стадию бластоцисты экспандированной (БЭ), соответственно (табл. 5).

Полученные данные свидетельствуют о том, что контакт эмбрионов в течение 2-х часов в среде с комплексом антибиотиков гентамицин + ампициллин в концентрациях 12 мг/мл и 100 Ед/мл, соответственно, не оказывает на их дальнейшее развитие более существенного влияния, чем комплекс антибиотиков пенициллин + стрептомицин в общепринятых концентрациях (100 и 50 Ед/мл). Учитывая большую бактерицидную активность предложенного комплекса антибиотиков по сравнению с комплексом пенициллин + стрептомицин можно считать целесообразным его использование для санации промывных буферных сред и эмбрионов в практике эмбриотрансплантации.

С целью определения влияния комплекса антибиотиков гентамицин + ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл) на приживляемость эмбрионов проведены опыты по пересадке их реципиентам. При подготовке эмбрионов к пересадке мы проводили последовательное отмывание их в пяти чашках буферными средами, содержащими вышеуказанный комплекс антибиотиков. Контролем служили эмбрионы, отмытые средами, не содержащими антибиотиков.

Отмытые опытные и контрольные эмбрионы пересаживали телкам-реципиентам. Стельность определяли по результатам ректальных исследований.

Данные по влиянию антибиотиков на приживляемость эмбрионов приведены в таблице 6.

Таблица 6. Влияние антибиотиков на приживляемость эмбрионов

Данные таблицы 6 свидетельствуют о том, что из 28 реципиентов, которым были пересажены эмбрионы, отмытые в средах с комплексом антибиотиков гентамицин+ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл), стельными стали 21 голова, что составило 75%, в контроле из 32 реципиентов только 16 голов оказались стельными или 50%.

Таким образом, комплекс антибиотиков гентамицин+ампициллин не только дает хороший антимикробный эффект, но и повышает приживляемость эмбрионов за счет того, что в матку реципиента вместе с пересадочным материалом (эмбрионами) вводилось небольшое количество среды с антибиотиками, которые создавали асептические условия в конкретном участке матки. Поэтому мы рекомендуем всем пунктам трансплантации добавлять указанный комплекс антибиотиков в среды для отмывки эмбрионов.

4.5.2 Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий

Экономический ущерб от снижения молочной продуктивности:

У2к =7*13,1*60*0,73=1049,38 грн.

У2оп.=16*13,1*60*0,73=9180,48

Экономический ущерб от недополучения приплода:

У5= Кр (Рв – Рф) * Сп, где

Кр – коэффициент рождаемости

Рв – планировалось отелится

Рф – фактический отел

Сп – стоимость теленка при рождении

У5к = 0,5*(28–21)*263,53=922,3 грн.

У5оп = 0,5* (32–16)*263,53=2108,24 грн.

Уфк = У2 – У5 = 12971,74 грн.

Уф оп = 9180,48+2108,24=11288,72 грн.

Предотвращенный экономический ущерб при трансплантации эмбрионов

Пу = М0 * Кз * Кп * Ц – Уф

М0 – количество восприимчивого поголовья

К3 – коэффициент заболеваемости

Кп - удельная величина потерь основной продукции в расчете на 1 заболевшее животное

Пу (к) = 160*0,375*617,7*0,73–12971,74=14083,52

Пу (оп) = 160*0,375*705,55*0,73–11288,72=19614,37

Зв (к) = 152,3*32=4873,6

Зв (оп) = 157,6*28=4412,8

Эв = Пу – Зв

Эв (к) = 14083,52

Эв (оп) = 19614,37–4412,8=15201,57

Экономический эффект на 1 грн. ветеринарных затрат

Эгрн = Эв / Зв

Эгрн = 9209,92/4873,6=1,89

Эгрн = 15201,57/4412,8=3,44

Вывод: экономическая эффективность ветеринарных мероприятий на 1 гривну ветеринарных затрат составила в контрольной группе 1,89 грн, а в опытной – 3,44 грн, что оправдывает проведение данных мероприятий.

4.6 Обсуждение результатов собственных исследований

Как известно, низкий уровень воспроизводства у самок и длительный интервал времени между поколениями, в среднем 6-7 лет у крупного рогатого скота, ограничивают генетический прогресс в животноводстве. В настоящее время эта проблема решается в значительной степени за счет внедрения новых более радикальных методов разведения животных, в частности метода трансплантации эмбрионов. Значительным недочетом существующей технологии трансплантации является то, что она не предусматривает специальных мероприятий, повышающих приживляемость эмбрионов. Основной задачей нехирургической эмбриотрансплантации является повышение приживляемости эмбрионов, зависящей от многих факторов, одним из которых является асептичность всех проводимых операций.

На приживляемость эмбрионов оказывает влияние много причин. В своей работе мы изучали только влияние микробного фактора на приживляемость эмбрионов. Из литературных данных известно, что в процессе эволюции у животных сложились мощные иммунные барьеры, препятствующие инфицированию половых путей микрофлорой. Основными факторами, обеспечивающими защиту половых путей коров и телок являются барьерные функции слизистых оболочек, особенно шейки матки. Так, цервикальная слизь во время течки и охоты обладает бактерицидным действием (В.П. Полищук, 1984; В.С. Шипилов, 1988). Другие исследователи сообщают, что даже во время течки и половой охоты у многих коров в пробах слизи из шейки матки были обнаружены различные бактерии (M. Krisha et al., 1974).

Наши бактериологические исследования показали, что в промывных буферных средах даже у здоровых животных были обнаружены ассоциации микроорганизмов: E.coli, Staph.aureus, Staph.album, Pseudomonasa., Bac.subtilis.

Зная видовой состав микробов промывных буферных сред, который близок к таковому половых путей реципиентов, нами проведены испытания по санации промывных буферных сред и эмбрионов. Как известно из практики искусственного осеменения, для санации спермы используют различные антибиотики и их комбинации. Применение антибиотиков при эмбриотрансплантации ограничено. Для санации промывных буферных сред А.Д. Бугров и И.М. Величко (1986) использовали гентамицин в комплексе с пенициллинами в концентрации 12 мкг на мл и 100 Ед на мл, соответственно. В своей работе мы испытали три комплекса антибиотиков: гентамицин с ампициллином и гентамицин с пенициллином в концентрациях 4, 6, 10 и 12 мкг / мл и 100 Ед / мл, пенициллин со стрептомицином 100 и 50 Ед/мл, рекомендуемый инструкцией по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. Лучшими антимикробными свойствами обладали комплексы антибиотиков гентамицин с ампициллином и гентамицин с пенициллином в концентрациях 12 мкг / мл и 100 Ед /мл. Концентрация гентамицина 4, 6 и 10 мкг / мл хотя и подавляла в комплексе с пенициллинами рост синегнойной палочки, но полной бактерицидной активности не наблюдалось. Комбинация пенициллина со стрептомицином оказалась неэффективной против синегнойной палочки и испытуемого штамма кишечной палочки. В контрольной среде, без добавления антибиотиков, наблюдали сплошной рост микроорганизмов.