Методы диагностики и профилактики микробной контаминации при трансплантации эмбрионовРефераты >> Ботаника и сельское хоз-во >> Методы диагностики и профилактики микробной контаминации при трансплантации эмбрионов
Результаты бактериологических исследований после инокуляции культур и добавления антибиотиков через 1,5-2 часа показали, что к комбинациям пенициллин + гентамицин в концентрациях 100 Ед/мл и 12 мкг/мл и ампициллин + гентамицин в тех же концентрациях чувствительными оказались все взятые в опыт штаммы микроорганизмов. Концентрация гентамицина 4, б, 10 мкг/мл в комплексе с пенициллином (100 Ед/мл) значительно снижали рост микрофлоры, но полной бактерицидной активности не наблюдалось.
Комбинация пенициллина со стрептомицином, в указанных концентрациях, оказалась неэффективной против синегнойной палочки и испытуемого штамма кишечной палочки.
Для санации промывных буферных сред использовали комплекс антибиотиков гентамицин + ампициллин в концентрации 12 мкг/мл и 100 Ед/мл, предложенный А.Д. Бугровым и И.М. Величко (1986). Нашими исследованиями подтверждено, что лучшим антимикробным средством является вышеуказанная комбинация антибиотиков.
Таблица 1. Сравнительная активность комбинаций антибиотиков на чистые культуры микроорганизмов
Концентрация антибиотиков (мкг/мл и ЕД/мл) |
Культуры микроорганизмов |
Количество проб |
Рост микроорганизмов на питательных средах | ||
МПА в чашках (кол-во колоний) |
МПБ |
Среда Булира | |||
Гентамицин 4 Пенициллин 100 |
В. Subtilis Ps. aeruginosa St. aureus E. coli |
4 4 4 4 |
132–327 132–327 - - |
+ - - |
- |
Гентамицин 4 Ампициллин 100 |
B. subtilis Ps. aeruginosa St. aureus E. coli |
4 4 4 4 |
9–72 - - |
+ - - |
- |
Гентамицин 6 Ампициллин 100 |
B. subtilis Ps. Aeruginosa St. aureus E. coli |
5 5 5 5 |
ед. - - - |
+ - - - |
- - - - |
Гентамицин 10 Ампициллин 100 |
B. subtilis Ps. aeruginosa St. aureus E. coli |
2 2 2 2 |
- ед. - - |
- - - - |
- - - - |
Гентамицин 12 Пенициллин 100 |
B. subtilis Ps. aeruginosa St. aureus E. coli |
4 6 4 5 |
_ - - - |
_ - - - |
- |
Гентамицин 12 Ампициллин 100 |
B. subtilis Ps. aeruginosa St. aureus E. coli |
4 4 4 4 |
- - - - |
- - - - |
- |
Пенициллин 100 Стрептомицин 30 |
B. subtilis Ps. Aeruginosa St. aureus E. coli |
5 5 5 5 |
сп л. рост сп л. рост |
+ + + + |
+ |
Примечание: (+) наличие роста, (–) отсутствие роста. В контроле без антибиотиков во всех пробах наблюдали рост вышеуказанных культур микроорганизмов.
В последствии нами проведен опыт. Результаты приведены в таблице 2.
Из данных таблицы 2 видно, что из 14 смывов, санированных комплексом антибиотиков гентамицин-ампициллин в концентрациях 12 мкг/мл и 100 Ед/мл, соответственно, 12 – свободных от микроорганизмов, что составляет 85%. В контрольных смывах без добавления антибиотиков только 42,9% смывов стерильны. Различия в росте микроорганизмов на питательных средах из контрольных и опытных смывов достоверны (Р<0,001). Учитывая вышеизложенное, мы считаем целесообразным для санации промывных буферных сред использовать комплекс антибиотиков гентамицин-ампициллин в концентрации 12 мкг/мл и 100 Ед/мл.
Таблица 2. Действие комплекса антибиотиков гентамицин-ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл) на микрофлору промывных сред
Среды для вымывания эмбрионов |
Всего исследовано смывов |
Отсутствие роста микроорганизмов на питательных средах (МПБ, МПА) | |
Количество |
% | ||
Гентамицин + ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл) (опыт) |
14 |
12 |
85 |
Без антибиотиков (контроль) |
14 |
6 |
42,9 |
Следовательно, из санированных промывных сред матки доноров большая вероятность получить деконтаминированные эмбрионы и предотвратить занос микроорганизмов в матку реципиента.
Полученые нами, промывные маточные среды от коров-доноров оценивали по внешним признакам: цвету, прозрачности. Из 14 проб, в которые антибиотики не добавляли, в 8 случаях (57,1%) отмечали рост микрофлоры на питательных средах и по внешнему виду они были мутными с примесями слизи. Это было основанием предположить, что в промывную маточную среду слизь могла попасть из влагалища или шейки матки, а также из матки при наличии скрытого эндометрита. Добавление антибиотиков в промывные буферные Среды снижали их бактериальную загрязненность и профилактировали эндометриты.
Кроме этого, санированная промывная среда профилактирует возникновение эндометритов при многократном использовании доноров. Микроорганизмы, попадая в микротравмы при извлечении эмбрионов, могут вызвать эндометриты. Об этом свидетельствуют данные В.И. Завирюхи, С.П. Хомина и соавт. (1987). Проведенный ими анализ практической работы показывает, что после проведения нескольких вымываний у коров-доноров развивается гнойной эндометрит.