Микроклональное размножение Ириса Низкого путем изолирования зародыша как способ сохранения вида
· Спиртовка
· Автоклав
· Штатив
· Фильтровальная бумага
2.5 Личный вклад
Автор работы принял личное участие в сборе полевого материала и лабораторных исследованиях под руководством научного сотрудника ГУ « Волгоградский региональный ботанический сад» Ю.Б. Утц и благодарит за предоставленную возможность проведения исследований директора ГУ «Волгоградский региональный ботанический сад» О.И. Короткова.
2.6 Результаты исследований и обсуждение
В качестве первичного материала для введения в культуру in vitro нами были использованы изолированные зародыши.Предварительно обрабатывали их 95%-ным этиловым спиртом в течение 50-60 секунд. В качестве стерилизатора использовали 3%-ый «Лизоформин» (действующие вещества: глутаровый альдегид, глиоксаль и дидецилдиметиламмоний хлорид). «Лизоформин» применяется для дезинфекции медицинских изделий и обладает не только бактерицидными, фунгицидными и спороцидными, но и вирулицидными свойствами, что является важным моментом для получения стерильных эксплантов.
О О
С–СН2–СН2–СН2–С
|
|
Глутаровый альдегид С–С Сl-
Н Н С10Н4 + СН3
|
Глиоксаль N
С10Н4 СН3
дидецилдиметиламмоний хлорид
Схема 1. Молекулярная структура действующих веществ Лизоформина.
Оптимальное время стерилизации 7-10 мин. Поверхностно простерилизованные и промытые семена высаживали в чашки Петри на агаризованную питательную среду Мурасиге – Скуга без добавления фитогормонов. Основная часть семян прорастала на 7 – 10-е сутки, остальные на 13 – 15 сутки с момента помещения их на питательную среду. Полученные проростки в асептических условиях расчленяли на фрагменты и переносили для роста и размножения на питательную среду Мурасиге – Скуга с добавлением 0.5 мг/л 6-БАП.
Для оптимизации состава среды на этапе микроразмножения к питательной среде, содержащей минеральные соли по Мурасиге и Скугу, добавляли в различных концентрациях 6-БАП (0.1; 0.5; 1.0 мг/л), зеатин (0.1; 0.5; 1.0 мг/л), кинетин (1.0; 2.0; 5.0 мг/л) и для вытягивания побегов гибберелловую кислоту (0.2 и 0.4 мг/л). При этом снимались следующие показатели:
1. Коэффициент размножения – количество растений, развившихся из одного экспланта;
2. Количество аномальных (витрифицированных) растений;
3. Количество листьев;
4. Высота растения.
Таблица №1. Влияние гормона зеатина на регенерацию и рост побегов Майкарагана волжского.
1-ая повторность
|
гормон |
Концентрация, мг/л |
В начале пассажа |
В конце пассажа |
h2-h1 |
Кол-во листьев2-кол-во листьев1 | |||
|
h1 |
Кол-во листь ев1 |
h2 |
Кол-во листьев2 |
Коэф. размноже ния | ||||
|
3.2 |
1 |
3,7 |
2 |
1 |
0,5 |
1 | ||
|
0,5 |
3 |
2 |
3,3 |
3 |
1 |
0,3 |
1 | |
|
1,5 |
1 |
1,9 |
1 |
1 |
0,4 |
0 | ||
|
3,5 |
1 |
4,2 |
4 |
1 |
0,7 |
3 | ||
|
1,8 |
2 |
2,8 |
4 |
3 |
1 |
2 | ||
|
зеатин |
Среднее значение |
2,6 ± 0,4 |
1,4 ± 0,2 |
3,2 ± 0,4 |
2,8 ± 0,6 |
1,4 ± 0,4 |
0,6 ± 0,3 |
1,4±0,5 |
|
1,2 |
1 |
1,5 |
1 |
1 |
0,3 |
0 | ||
|
3 |
1 |
3,2 |
5 |
1 |
0,2 |
4 | ||
|
1 |
0,5 |
1 |
0,9 |
1 |
1 |
0,4 |
0 | |
|
3,8 |
1 |
4,7 |
4 |
1 |
0,9 |
3 | ||
|
4,5 |
1 |
5,4 |
7 |
1 |
0,9 |
6 | ||
|
Среднее значение |
2,6 ±0,8 |
1 |
3,14±0,9 |
3,6 ±1,2 |
1 |
0,54 ±0,2 |
2,6±1,2 | |
|
1,2 |
1 |
1,6 |
1 |
1 |
0,4 |
0 | ||
|
1,7 |
1 |
1,9 |
1 |
1 |
0,2 |
0 | ||
|
0,1 |
3,2 |
3 |
4 |
5 |
1 |
0,8 |
2 | |
|
2 |
1 |
2,4 |
3 |
1 |
0,4 |
2 | ||
|
4 |
1 |
4,1 |
1 |
1 |
0,1 |
0 | ||
|
Среднее значение |
2,4 ±0,5 |
1,4 ±0,4 |
2,8 ±0,5 |
2,2 ±0,8 |
1 |
0,4 ±0,1 |
1 ±0,3 | |
