Приведём калибровочные графики для определения содержания пирувата и лактата:

В источнике [7] содержание глюкозы в тканях почки определялось о‑толуидиновым методом, сущность которого заключается в ферментативном окислении глюкозы до глюконовой кислоты с образованием перекиси водорода, которая затем определялась с помощью о‑толуидина. Этот метод более специфичен для определения глюкозы чем феррицианидный, так как исключает практически все побочные процессы.

В источнике [8] для определения гликогена ткани почек для исследования брали прижизненно под местной новокаиновой анестезией. Количество общего гликогена определяли по методу Пфлюгера. Количество истинной глюкозы определяли по методу Нельсона. Эти методы более специфичны. Этим можно объяснить расхождение в результатах по гликогену.

В источнике [10] в основу определения пирувата положен ферментативный метод. Он основан на непрямом определении количества оксалоацетата, синтезируемого в ходе ферментативной реакции из пирувата и двуокиси углерода по окислению НАДН в присутствии избытка малатдегидрогеназы. Убыль НАДН регистрировали спектрофотометрически. Этим можно объяснить расхождение в результатах по пирувату, так как метод более специфичен. Вид калибровочного графика позволяет говорить о систематической ошибке, однако, расхождение в литературных и экспериментальных данных невелико.

В источнике [9] в основу определения содержания лактата положен метод Хохорста. Принцип метода. В присутствие лактатдегидрогеназы лактат переходит в пируват, причём связывание образуется в ходе реакции пирувата с гидразин-глициновым буфером, что способствует полному окислению лактата.

Образовавшееся количество НАДН эквимолярно количеству окисленного лактата. Регистрацию проводили спектрофотометрически.

Выводы

В ходе экспериментальной работы были получены результаты, которые были сопоставлены с литературными данными. К сожалению, не удалось найти статьи, в которой был бы использован феррицианидный метод (во всех работах использовались разнообразные ферментативные методы), а также не во всех работах использовались крысы – линии Вистар (в источнике [7] опыты проводились на беспородных крысах обоих полов). Поэтому, литературные данные могут быть не достаточно точными по отношению к данной линии. Однако, результаты, полученные в опытах, в основном совпали с литературными данными, кроме глюкозы. По-видимому в опыте с определением глюкозы в почке была допущена грубейшая ошибка. Но результаты можно считать, на мой взгляд, приемлемыми.

Список использованной литературы:

1. Берёзов Т.Т., Коровкин Б.Ф., Биологическая химия – М., Медицина, 1998 г.

2. Физиология человека /Под ред. Смирнова В.М./ – М., Медицина,2001 г.

3. Общий курс физиологии человека и животных /Под ред. Ноздрачёва А.Д./ – М., Высшая школа, 1991 г.

4. Страйер Л., Биохимия, – М., Мир, 1984 г.

5. Биохимия человека, Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В., – М., Мир, 1993 г.

6. Пандакова В.Н., Цупило И.А., Лабораторный практикум по обмену веществ, – Донецк, ДонГУ, 1990 г.

7. Украинский биохимический журнал, 1986 г., т. 58, №6, “Гликолиз в почках крыс в ранний период после ишемии и при введении ингибиторов кальмодуллина – АМФ и НАД ”, И.З.Тамарина, Г.В. Лысцова, В.И. Чумаков.

8. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1979 г., т. 87, №6; “Измерение активности ключевых ферментов глюконеогенеза в печени и почках крыс при действии субэкстремальных и экстремальных факторов”, Панин Е.

9. Пируват и лактат в животном организме /под ред. Островского/ – Минск, 1984 г.

10. Биохимия, т. 35, вып. 1, 1970 г., “Глюконеогенез и гликолиз в почках крыс нормальных и с аллоксановым диабетом”, В.С. Ильин, М.Д. Балябина.

11. Большая Советская Энциклопедия, том 1, 3, 4, 15, 20, 21, М., 1975

12. Физиология почки, под ред. Ю.В. Наточина, Л., 1972

13. Основы нефрологии, под ред. Е.М. Тареева, М., 1972