Приготовление плазмы. Используют кровяную плазму кролика цельную или разведенную физиологическим раствором 1:2 – 1:4. Взятую у кролика из сердца (в стерилъных условиях) около 10 см крови помещают в пробирку с 1 см 5%-го стерильного раствора лимоннокислого натрия, тщательно перемешивают, центрифугируют. Плазму (надосадочную жидкость) переносят в стерильные пробирки и хранят в холодильнике при +4-+6°С – 4–5 сут. Можно использовать для реакции плазмокоагуляции сухую кроличью плазму биофабричного производства

Стафилококки достаточно активны в биохимическом отношении. Они ферментируют ряд углеводов до кислоты без газа: маннит, лактозу, глюкозу, сахарозу, мальтозу. Патогенные стафилококки разжижают желатин, свертывают, а затем пептонизируют молоко, вызывают гемолиз эритроцитов. Образуют сероводород, индол не выделяют. Продуцируют каталазу, уреазу, аммиак и водород. Патогенные стафилококки выделяют ряд ферментов: плазмокоагулазу, желатиназу, липовителлин, ДНК-азу, бета-лакталазу, фибринолизин, лизоцим и др., кроме того, выделяют энтеротоксин, лейкоцидин, токсин общего летального действия и др.

Среди неспорообразующих микробов стафилококки наиболее устойчивы к различным физическим и химическим факторам. В высушенных субстратах они сохраняются более 6 месяцев не теряя вирулентности, в пыли – 50–100 дней, в течение нескольких часов они выдерживают действие прямых солнечных лучей. Нагревание до 70°С выдерживают более 1 часа, при кипячении погибают мгновенно (за исключением энтеротоксина, выделяемого токсигенными штаммами стафилококков). В мясных хлебах погибают только при достижении в центре батона температуры 85–90°С. Низкие температуры подавляют жизнедеятельность стафилококков (их размножение и токсинообразование), но не убивают их. Так при -10 –-18°С в тушках птиц стафилококки сохраняют свою жизнеспособность и токсигенность в течение 35 месяцев. 5%-й раствор фенола действует губительно после 30-минутного воздействия. Стафилококки чувствительны к анилиновым красителям (особенно к бриллиантовому зеленому) и некоторым антибиотикам. Резистентны к действию чистого этанола и к препаратам хлора.

Патогенные стафилококки обладают способностью продуцировать токсины: летальный, гемолитический, некротический, лейкоцидин, энтеротоксин. Кроме токсинов патогенные стафилококки вырабатывают ферментативные субстанции (фибринолизин, гиалуронидазу, плазмокоагулазу, лецитиназу), усиливающие действие токсинов на организм. Наиболее патогенен золотистый стафилококк, который выделяет экзотоксины, обусловливающие пищевые отравления. Стафилококк, образующий энтеротоксин, впервые был выделен из вымени коровы, больной маститом. Энтеротоксин термостабилен, не разрушается в течение 30 минут при 100ºС, не утрачивает токсических свойств под действием формалина. При скармливании продуктов, содержащих токсины, котятам, крольчатам, белым мышам они быстро погибают.

Патогенные стафилококки содержат протеиновый и полисахаридный антигены. Протеиновый антиген, общий для всей группы стафилококков, обладает видовой специфичностью, он нетоксичен для животных. Полисахаридный антиген специфичен для различных типов стафилококков. Он содержит энтеротоксины A, B, C, D. Наиболее часто пищевые интоксикации вызывает энтеротоксин А («пищевой» – токсин), устойчивый к нагреванию. Энтеротоксин В («кишечный» – токсин) термолабилен, обусловливает возникновение энтеритов у детей, его часто обнаруживают в продуктах, вызывающих интоксикацию. Энтеротоксин С вызывает рвоту у обезьян, а энтеротоксин D – у кошек.

Патогенные стафилококки вызывают местные гнойные воспалительные процессы: фурункулы, абсцессы, флегмоны, маститы, нагноение раны. Из домашних животных к стафилококковой инфекции наиболее восприимчивы лошади, собаки, крупный и мелкий рогатый скот, свиньи; из лабораторных–кролики, белые мыши.

3. Источники обсеменения продуктов стафилококками

Чаще всего причиной стафилококковых токсикозов является употребление молока, мяса и мясных изделий, кондитерских изделий с заварным кремом и др., контаминированных патогенными стафилококками.

Органолептические свойства продуктов, в которых размножаются стафилококки и накапливаются энтеротоксины, не изменяются.

Основными источниками обсеменения стафилококками пищевых продуктов являются люди и животные с гнойно-воспалительными процессами (абсцессы, фурункулы, гнойные раны и др.), а также носители этих микроорганизмов. Перенос стафилококков от людей на пищевые продукта может происходить воздушно-капельным путем, при непосредственном контакте людей с продуктами, оборудованием, тарой и т.д., а также в процессе убоя скота и разделки туш.

В связи с тем, что основным источником обсеменения сборного молока стафилококками является молоко, полученное от коров, больных маститом, необходимо выявлять больных животных, особенно с субклиническими формами маститов, и не допускать смешивания маститного и сборного молока.

Источником обсеменения молока патогенными стафилококками могут быть люди с гнойничковыми поражениями кожи (фурункулами, абсцессами, нагноившимися ранами и царапинами), а также больные ангиной. Такие люди не должны допускаться к работе на пищевых предприятиях.

Энтеротоксигенные стафилококки размножаются в пищевых продуктах даже при содержании в них около 40% влаги. Они могут развиваться в продуктах, содержащих от 7% до 12% хлорида натрия. Сахар угнетает развитие стафилококков при концентрациях 30–40%. Некоторые микроорганизмы (В. сеreus, дрожжи из рода Саndidа и др.) оказывают на стафилококки стимулирующий эффект (они усиливают образование энтеротоксина).

При благоприятных температурных условиях энтеропатогенные стафилококки быстро размножаются в продуктах и продуцируют токсин (энтеротоксин). Пищевые токсикозы, вызванные энтеропатогенными стафилококками, протекают в форме острого гастроэнтерита, сопровождающегося рвотой, реже диареей, головной болью. Инкубационный период очень короткий – от 30 мин до 6 ч. Длится заболевание один, реже – два, три дня.

Энтеротоксин стафилококков обладает высокой термоустойчивостью. Инактивирование (разрушение) токсина происходит только через 2,5–3 часа кипячения. При автоклавировании (120°С) токсин разрушается через 20 мин.

4. Диагностика

Диагноз стафилококковых токсикозов ставят на основании клинической картины болезни и эпидемиологических данных.

Микробиологические исследования вспышек стафилококковых токсикозов ведется в следующих направлениях:

1. выделение возбудителя от пострадавших (из промывных вод желудка, рвотных масс, испражнений) и остатков пищевых продуктов; в случае выделения культуры стафилококка проводят идентификацию до фаговара;

2. определение в исследуемом материале (или выделенной культуры) энтеротоксина;

3. обнаружение источника инфицирования продукта или носительства среди людей, принимавших участие в приготовлении пищевого продукта, послужившего причиной отравления.

При отсутствии иммунных сывороток к стафилококковым энтеротоксинам можно поставить биологическую пробу на щенках собак или на котятах в возрасте 1–2,5 мес. Животным скармливают подозреваемый продукт или фильтрат выделенных культур стафилококков. Через 30–60 мин у животных наблюдаются симптомы гастроэнтерита: рвота, диарея, после прекращения которых животные выздоравливают.