Основные принципы подбора условий разделения
EXtrelut® NT: принцип работы
Водная проба наносится на сорбент EXtrelut® NT, распределяясь в виде тонкой плёнки на поверхности химически инертной матрицы и выполняя функции своего рода неподвижной фазы. Затем осуществляется элюирование несмешивающимися с водой органическими растворителями, такими как диэтиловый эфир, этилацетат или галогенсодер-жащие углеводороды. Все липофильные вещества экстрагируются из водной фазы в органическую. В течении всего процесса водная фаза остаётся неподвижной. Элюат не содержит эмульсий и может быть подвержен упариванию для последующего анализа.
Важные параметры экстракции колонок EXtrelut® NT
|
Вид колонки EXtrelut NT® |
Размеры наконечника |
Максимальный объём пробы 2) (мл) |
Время экстракции 3) (перед элюированием) (мин) |
Рекомендуемый объём элюирования 4) (мл) |
|
EXtrelut® NT 1 |
0.60 x 30мм |
1 |
5-10 |
6 |
|
EXtrelut® NT 3 |
0.60 x 30мм |
3 |
5-10 |
15 |
|
EXtrelut® NT 20 1) |
0.70 х 30мм |
20 |
10-15 |
40 |
1) При использовании колонок EXtrelut® NT 20 времена элюирования лежат в диапазоне 5 - 20 мин в зависимости от типа водного раствора, значения рН и органического растворителя. При использовании 40мл элюирующего растворителя объём элюата составляет 25 мл. Мёртвый объём колонки составляет 15 мл. При наличии большого количества гидрофильных веществ в пробе допускается помутнение элюата. Подобное помутнение не препятствует последующей стадии упаривания (концентрирования).
2) Для предотвращения проскока воды не перегружайте колонку.
3) Более короткие времена могут сказаться негативно на выходе целевых веществ.
4) Приведены оптимальные значения, установленные опытным путём. Растворы меньших объёмов следует разбавлять до получения рекомендуемых значений.
Пример использования колонок EXtrelut® NT
Колонки EXtrelut® NT уже на протяжении долгого времени используются для подготовки проб мочи, крови, плазмы, сыворотки, желудочного сока, кала, животных и растительных тканей, спиртных напитков. Существует множество других применений в области анализа следовых количеств веществ в объектах окружающей среды, например анализ промышленных, питьевых или сточных вод. С помощью данного метода возможно также фракционирование кислотных и основных веществ, например лекарственных средств и их метаболитов в биологических жидкостях.
Определение противоэпилептических лекарственных средств в сыворотке человеческой крови
*= 17.6 г NaH2PO4,4,5 г Na2HP04 2 H20,1.5 г NaN3, растворить в 1 литре воды (рН 6,0 - 6,1)
ВЭЖХ разделение после подготовки пробы с помощью EXtrelut® NT1
Выходы (средние значения для 3 опытов)
|
1 |
Этосуксимид* |
14.1мин |
84±7% |
|
2 |
Примидон |
19.4мин |
100 ± 2 % |
|
3 |
а-метил-а-пропилсукцинимид |
22.5мин |
Внутренний стандарт |
|
4 |
Фенобарбитал |
26.9мин |
96±2% |
|
5 |
Гексобарбитал |
34.2мин |
99±2% |
|
6 |
Карбамазепин |
36.4мин |
97 ±1% |
|
7 |
Фенитоин |
38.0мин |
100 ± 1 % |
|
*Этосуксимид - летучее соединение | |||
|
Условия хроматографирования | |
|
ВЭЖХ |
ВЭЖХ система LaChrom® |
|
Колонка |
LiChroCART® 250-4 LiChrospher® RP-select B 5µ Cat. No. 1.50839 |
|
Подвижная фаза |
А. Вода LiChrosolv®, Cat. No. 1.15333 Ацетонитрил LiChrosolv® (1+1), Cat. No. 1.00030 В: Вода LiChrosolv®, Cat. No. 1.15333 |
|
Профиль градиента |
Время/мин %А %B 0 10 90 30 60 40 44 60 40 44.1 100 0 50 100 0 51 10 90 75 10 90 |
|
Расход |
1мл/мин |
|
Температура |
30 °C |
|
Детектирование |
УФ 205нм |
LiChrolut®
Твердофазная экстракция (ТФЭ) на сорбентах LiChrolut® - быстрый и надёжный путь к успешной подготовке пробы.
Основной целью твердофазной экстракции является селективное выделение целевых компонентов из объектов со сложной матрицей или проб с чрезмерно большим объёмом непосредственно перед анализом (ВЭЖХ, ГХ, ТСХ). В соответствии с принципом жидкостной хроматографии это достигается за счёт сильного, но обратимого взаимодействия анализируемого вещества и поверхности неподвижной фазы. Типичными видами взаимодействий являются: гидрофобные (Ван-дер-Ваальсовы силы), полярные (водородное связывание, диполь - дипольные взаимодействия) или электростатические взаимодействия. Взаимодействия между неподвижной фазой и матрицей образца должны исключаться. Таким образом большое значение приобретает дополнительная перед нанесением подготовка образца, которая сделала бы различия химических свойств анализируемого компонента и компонентов матрицы более ярковыраженными. Предварительная подготовка может заключаться в изменении значения рН или ионной силы раствора образца. При соблюдении вышеупомянутых условий анализируемое вещество концентрируется в виде узкой зоны на неподвижной фазе. После стадии промывки, в ходе которой удаляются нежелательные сорбировавшиеся компоненты пробы, следует стадия селективного элюирования целевых компонентов.
