В медицинской практике применяют лизоцим, выделенный из белка куриного яйца - самого богатого источника данного фермента (Бухарин О. В., 1979). Схожесть физико-химических свойств и антигенных структур экзогенного и эндогенного (человеческого) лизоцимов определяет единые механизмы регуляции их уровня в организме, а также минимизирует побочное действие данного «идеального» природного иммуномодулятора.

Лизоцим стабилен при воздействии высоких температур и кислот – фермент сохраняет активность в кислых растворах в течение 45 минут. В щелочных растворах он выдерживает нагревание значительно хуже, чем в подкисленных - при рН = 9 при нагревании до 100°С он разрушается через 5 мин (Бритвина Е. И., 1976).

Хорошо известно литическое действие лизоцима в отношении грамположительных бактерий: M. lysodeikticus, B. megatherium, S. flava (Бритвина Е. И., 1976). Избирательное действие лизоцима на клеточные оболочки преимущественно грамположительных бактерий связано, по-видимому, со следующими различиями в составе клеточных оболочек грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов: грамположительные микроорганизмы, в отличие от грамотрицательных бактерий, не содержат ароматических аминокислот пролина, гистидина, аргинина. В оболочке грамотрицательных бактерий содержится больше липополисахаридов.

Имеются сведения, что дополнительная обработка усиливает чувствительность грамотрицательных бактерий к лизоциму. Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa , Azotobacter vinelandii и некоторые другие виды лизируются лизоцимом в присутствии версена (этилендиаминотетрауксусная кислота). Бактерии кишечной группы лизируются лизоцимом в сочетании с таурохолевокислым натрием. Лизис некоторых микроорганизмов, не чувствительных или малочувствительных к лизоциму, может быть достигнут при сочетанном применении лизоцима и трипсина (Бритвина Е. И., 1976).

Описаны функции лизоцима – разрушение клеточной стенки грамположительных бактерий, регуляция воспалительных реакций (снижение воспаления), неспецифической иммуномодуляции (при расщеплении клеточной стенки бактерий, лизоцим высвобождает мурамилдипептид, который является мощным стимулятором иммунитета, а также активатора фагоцитоза (Бухарин О. В., 1974).

Мурамилдипептид (МДП) входит в состав пептидогликана клеточной стенки практически всех известных грамположительных и грамотрицательных бактерий. Его успешно применяют в современной иммунобиотехнологии (производство иммунотропных лекарственных средств). Выявлено дополнительное свойство МДП – нейтрализации эндогенных сенсибилизирующих агентов (гистамина и гистаминоподобных веществ).

1.2. Бета-лизины

Бета-лизины - катионные сывороточные белки, обладающие бактерицидной активностью к аэробным спорообразующим бактериям, особенно В. subtilis и В. anthracis. Бета-лизины слабочувствительны к УФЛ, термостабильны, не диализуются, адсорбируются на бентоните, имеют М. м. около 6 тыс. кД.

Бета-лизины находятся в крови и тканях человека и животных, особенно кроликов. Продуцентами их являются тромбоциты, хотя корреляция между активностью бета-лизинов и количеством тромбоцитов наблюдается не всегда. Уровень бета-лизинов колеблется в зависимости от возраста и других физиологических факторов.

У здоровых новорожденных активность бета-лизинов около 24%, к трехлетнему возрасту она достигает 52%, а затем снижается до 32% и на таком уровне держится до 60 лет.

Выявлено изменение активности бета-лизинов при разных заболеваниях. При хроническом лимфолейкозе и остром лейкозе уровень бета-лизинов снижается, в острой фазе воспалительных и аутоиммунных процессов повышается, при выздоровлении и переходе в хроническую форму приближается к норме. В связи с этим бета-лизины используют для оценки как состояния естественного иммунитета, так и остроты воспалительного процесса.

Механизм бактерицидного действия бета-лизинов не вполне ясен. Предполагается, что бета-лизины нарушают проницаемость мембраны бактерий. Для определения активности бета-лизинов по методике В. М. Супоницкой из основного разведения сыворотки 1:5 (0,6 мл сыворотки и 2,4 мл бульона) готовят ряд последовательных двукратных разведений (1 мл бульона и 1 мл предыдущего разведения сыворотки) от 1:10 до 1:640. Во все разведения вносят по 1 капле взвеси суточной агаровой культуры сенной палочки № 83 ГКИ плотностью 100 тыс. м.т./мл. К опыту ставят контроль культуры (1 капля культуры на 1 мл бульона, без сыворотки). Инкубируют 1 сутки при 37°С и результат учитывают сравнением опытных пробирок с контрольными. За титр бета-лизинов принимают максимальное разведение сыворотки, в котором имеется полное просветление взвеси (4+). Для определения активности бета-лизинов по О. В. Бухарину с соавтором (1970) в 1-ю пробирку (опытную) с 5,4 мл МПБ вносят 0,4 мл исследуемой сыворотки и 0,2 мл культуры бацилл; во 2-ю пробирку с 5,4 мл МПБ (контрольную) добавляют 0,2 мл взвеси бацилл и 0,4 мл прогретой, длительно хранившейся (свободной от бета-лизинов) сыворотки. Оптическую плотность опытной и контрольной смесей замеряют сразу после смешивания, а затем после 18 часов инкубации при 37°С на ФЭК-М с зеленым светофильтром № 2. Результаты сравнивают со стерильным МПБ той же серии. Активность бета-лизинов выражают в процентах ингибирующего действия исследуемой сыворотки на рост бактериальной взвеси в отношении контроля по формуле: 100 - (ДО2-ДО1)/(ДК2-ДК1) * 100, где ДО1, ДО2 - показатели оптической плотности в опытной пробе соответственно до и после инкубации; ДК1, ДК2 - показатели оптической плотности в контрольной пробе соответственно до и после инкубации.

1.3. Бактерицидная активность сыворотки крови

Бактерицидная активность сыворотки к1.3. Бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК) - свойство свежей сыворотки крови вызывать гибель проникших или внесенных в нее бактерий. Обусловливается раздельным или совокупным действием антител (Ат), комплемента (С), лизоцима, бета-лизинов и других менее идентифицированных факторов.

Изучение соотносительного значения перечисленных факторов показало, что инактивация С существенным образом снижает БАСК, добавление антител резко повышает ее, отсутствие лизоцима и 3-лизина приводит к более или менее выраженному снижению БАСК в зависимости от чувствительности к ним бактерий. Механизм кооперативного действия представляется так: система Ат-С разрушает клеточную стенку и цитоплазматическую мембрану; лизоцим - пептидогликан клеточной стенки; бета-лизины - цитоплазматическую мембрану.

Следовательно, уровень БАСК является интегральным показателем антимикробных свойств сыворотки крови. Падение его указывает на глубокие нарушения в иммунитете и служит неблагоприятным прогностическим признаком, повышение уровня БАСК оценивается положительно, но только на условно-потенциальные паразиты.

При существующих методах определения БАСК в качестве объекта обычно используют не возбудителя 6олезни, а штаммы кишечной палочки, относительно устойчивые к лизоциму. В результате они отражают главным образом уровень С и нормальных антител против микроба. Тем не менее БАСК - самостоятельный показатель активности естественного иммунитета, так как прямой связи между БАСК и активностью С нет.