Откладывая по оси абсцисс содержание витамина В12, а по оси ординат коэффициенты поглощения, строят калибровочную кривую, по которой и отсчитывают, какому количеству витамина В12 соответствует коэффициент поглощения испытуемого образца.

Витамин С(Аскорбиновая кислота)

(Мол. вес 176,12)

Качественные реакции

1. Растворяют 0,1 г аскорбиновой кислоты в 2 мл воды и приливают 0,5 мл раствора нитрата серебра. Выпадает осадок металлического серебра.

2. Раствор аскорбиновой кислоты (0,1 г в 2 мл) в воде остается бесцветным от прибавления 1 капли раствора йода или хлорида железа.

Количественное определение

Йодометрический метод основан на окислении аскорбиновой кислоты йодом с превращением ее в окисленную дегидроформу:

Растворяют 0,3 г препарата (точная навеска) в 25 мл воды и титруют до появления неисчезающей желтой окраски 0,1 н. раствором йода, 1 мл которого соответствует 0,0088 г аскорбиновой кислоты.

Вместо йода можно применять йодат калия. Навеску препарата с содержанием 0,01 г аскорбиновой кислоты растворяют в 100 мл воды. К 10 мл раствора прибавляют 5 мл 5%-ного раствора йодида калия, 5 мл 2%-ной соляной кислоты, 50 мл воды и 10 мл 0,004 н. раствора йодата калия и оставляют в темном месте в течение 30 минут. Не вошедший в реакцию свободный йод оттитровывают 0,004 н. раствором тиосульфата натрия (индикатор раствор крахмала). 1 мл 0,004 н. раствора йодата калия соответствует 0,000352 г аскорбиновой кислоты. Рассчитывают по формуле (а—b) · 0,000 352, где а — количество раствора йодата калия в миллилитрах, b — количество раствора тиосульфата натрия в миллилитрах. Аскорбиновую кислоту можно определять по реакции восстановления 2,6-дихлорфенол-индофенола, но этот метод мало применим при контроле рецептуры.

Витамин D2(Кальциферол)

Качественные реакции

1. К 2 мл раствора препарата в сухой пробирке добавляют 5 капель раствора пирогаллола. Растворитель отгоняют, нагревая пробирку на водяной бане, и оставляют лишь несколько десятых миллилитра раствора. Затем прибавляют 3 капли раствора хлорида алюминия и снова нагревают на водяной бане. Несколько выше дна пробирки начинает появляться красно-фиолетовая корочка, окраска которой достигает наибольшей интенсивности примерно через 4 минуты. Окрашенное вещество можно растворить в 5 мл спирта. Такой раствор, налитый в пробирку, закрытую резиновой пробкой, сохраняет интенсивность окраски в течение часа. Реакция удается лишь при условии применения совершенно безводных реактивов, тщательно высушенной посуды и при строгом соблюдении порядка прибавления реактивов. Необходимы реактивы: 1) 0,1%-ный раствор пирогаллола в абсолютном спирте и 2) 10%-ный раствор сублимированного хлорида алюминия.

2. К 1—2 мг препарата добавляют равное количество сахарозы и растворяют смесь в 1—2 мл абсолютного спирта. После добавления 2 капель концентрированной серной кислоты появляется красная окраска, переходящая в синюю от добавления 6 капель разбавленной серной кислоты.

3. К 0,2 мл раствора препарата D (2 мг кристаллического витамина D в 1 мл хлороформа) добавляют 4 мл раствора хлорида сурьмы. Появляется оранжево-красная окраска, быстро достигающая максимальной интенсивности и дающая резкую полосу поглощения при 500 ммк одинаковой силы для витаминов D2 и D3.

Витамин Е(б-токоферол)

Качественные реакции

При действии азотной кислоты токоферол образует соединение, окрашенное в яркий красный цвет (реакция характерна).

Количественное определение

Токоферол количественно окисляют раствором хлорида золота в 80%-ном спирте; титруют потенциометрически.

Витамин РР(Никотиновая кислота и никотинамид)

(Мол. вес 123,11)

Качественные реакции

1. Растворяют 0,01—0,02 г препарата при нагревании в 3 мл воды. К теплому раствору приливают 3 капли уксусной кислоты и 1 мл 5%-ного раствора ацетата меди. Выпадает осадок синего цвета.

2. В растворе никотиновой кислоты от реактива Зонненшейна (фосфорно-молибденовая кислота) выпадает желтый осадок, а от реактива Драгендорфа красный осадок.

3. Никотиновая кислота и ее амид дают с 2,4-динитрохлор-бензолом соли пиридиния, которые при действии щелочей расщепляются с образованием производных глутаконового альдегида, окрашенных в желто-красный цвет.

В 100 мл воды растворяют 10 мг никотиновой кислоты; 5 мл раствора выпаривают досуха на водяной бане в стаканчике емкостью 30 мл, затем добавляют 1 мл 10%-ного спиртового раствора 2,4-ди-нитрохлорбензола и после 2-часового стояния при комнатной температуре выпаривают снова досуха на водяной бане и держат еще в течение 10 минут при той же температуре. После охлаждения до 25° к остатку приливают 10 мл охлажденного до 10° 0,1%-ного спиртового раствора едкого натра. Раствор окрашивается в интенсивный желто-красный цвет.

Количественное определение

1. Сульфат меди осаждает в нейтральной среде осадок (C6H4O2N)Cu2; избыток меди определяется йодометрически.

Несколько порошков с содержанием 0,3—0,4 г (точная навеска) никотиновой кислоты растворяют в 25 мл свежепрокипяченной горячей воды и по охлаждении нейтрализуют (индикатор — фенолфталеин) сначала 0,5 н., а под конец 0,1 н. раствором едкого натра, переливают в мерную 100 мл колбу, прибавляют 10 мл раствора медного купороса, доводят до метки, перемешивают, дают стоять 10—15 минут и отфильтровывают через сухой фильтр в сухую колбу. К 50 мл фильтрата в конической колбе с притертой пробкой прибавляют 10 мл разведенной соляной кислоты, 2 г йодида калия, закрывают пробкой и дают стоять в темном месте 10 минут. Выделившийся йод титруют 0,1 н. раствором тиосульфата натрия (индикатор — крахмал), 1 мл которого соответствует 0,02462 г никотиновой кислоты.

Проводится контрольный опыт. Разность между вторым и первым титрованиями перечисляют на никотиновую кислоту.

2. В отсутствии мешающих веществ кислого или щелочного характера никотиновая кислота в спиртовом растворе может быть оттитрована 0,1 н. раствором едкого натра (индикатор—фенолфталеин).

Количественное определение никотиновой кислоты по циано-генбромидному методу основано на образовании никотиновой кислотой при взаимодействии с бромцианом бромцианпроизводного, которое в присутствии ароматических аминов (анилина и др.) распадается с образованием интенсивно окрашенного продукта — производного

Растирают в ступке 10—20 штук драже, взвесив для установления среднего веса, отбирают навеску в количестве 1—3 г на техно-химических весах и растворяют при нагревании в 10—15 мл перегнанной воды. По охлаждении раствор переливают в мерный цилиндр, разбавляют водой с таким расчетом, чтобы в 5 мл разведения содержалось 0,5—1 мг никотиновой кислоты, хорошо перемешивают содержимое цилиндра и фильтруют через складчатый фильтр.