При наличии обугленных частиц повторяют обработку золы раствором азотной кислоты.

Лабораторную стеклянную посуду промывали хромовой смесью, водой, азотной кислотой, дважды бидистилированной водой и высушивали. Затем промывали раствором дитизона 0,01 г/дм³ и хлороформом и высушивали на воздухе в вытяжном шкафу.

Измерения проводили на полярографе в режиме переменного тока с ртутно-капельным электродом в электролизере вместимостью 5см3. Полярограмму записывали при напряжении от -0,6 до -1,0 относительно донной ртути, выбирая режим работы в соответствии с инструкцией к полярографу.

Прямое полярографирование использовали в тех случаях, когда массовая доля кадмия или свинца в пробе обеспечивает получение четкого пика металла в полярограмме, а состав элементов в золе не создает помех. Для этой цели в две конические колбы вместимостью 10 или 25 см3 помещали 4 см3 контрольного или испытуемого раствора. В первую колбу добавляли 1 см3 соответствующего фонового электролита и пропускали через раствор азот или другой инертный газ в течение 10 минут. Затем раствор немедленно переносили в электролизер, предварительно промытый дистиллированной водой, фоновым электролитом и полярографируемым раствором, полярографировали и измеряли высоту пика токсикоэлемента .

Во вторую колбу вносили добавку - стандартный размер в таком количестве, чтобы высота пика токсикоэлемента на полярограмме, примерно удвоилась, по сравнению с первоначальной. Добавку следует вносить в малом объеме (не более 1 см3 ), чтобы предотвратить изменение концентрации фонового электролита и зольных элементов. Затем в колбу добавляли фоновый электролит в объеме, необходимом для доведения его до 5см3. Пропускали инертный газ, полярографировали в тех же условиях и измеряли высоту пика токсикоэлемента.

Полярографирование с предварительным внесением токсикоэлемента в испытуемый раствор проводили при анализе образцов с низкой массовой долей токсикоэлементов или в тех случаях, когда на полярограмме вследствие помех из-за сложного элементарного состава золы наблюдался только нечеткий изгиб в области пика токсикоэлемента. Для определения в две конические колбы вместимостью 10 или 25 см помещали по 4 см контрольного или испытуемого раствора и добавляли минимальное количество токсикоэлемента (0,2-0,5 мкг), которое обеспечило бы получение на полярограмме четкого пика кадмия или свинца.

Далее поступали так же, как и при прямом полярографировании. Массовую долю токсикоэлемента (X) в мг/кг или массовую концентрацию (X) в мг/дм вычисляли по высоте пиков, измеренных на полярограмме с помощью линейки с погрешностью до 1 мм, соответственно по формулам:

- при прямом полярографировании:

- при полярографировании с предварительным внесением токсикоэлемента:

где Н1 - высота пика, полученного при первом полярографировании, мм;

Н2 - высота пика, полученного при втором полярографировании, мм;

V2 - объем испытуемого раствора после внесения добавки, см;

V1- объем испытуемого раствора, приготовленного из озоленной навески, см;

М - масса навески продукта, взятая для озоления, г;

V - объем продукта, взятый для озоления, см;

Хк - масса свинца или кадмия в контрольном растворе, мкг;

M1 - масса токсикоэлемента, добавленная перед вторым полярографированием, мкг; М2 - масса токсикоэлемента, предварительно добавленная для получения четкого пика токсикоэлемента, мкг Мк – масса токсикоэлемента в контрольном растворе, мкг.

2.2Гистологические методы исследования

Кусочки органов размером 0,5х0,5 см фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина в течение 48 часов при комнатной температуре. Срезы изготавливали на санном микротом толщиной 5-7мкм. Окраску срезов проводили гематоксилином Эрлиха с последующее докраской 1 % раствором эозина и судана III на жир. Окрашенные срезы заключали в полистирол. Изучение срезов проводили под световым микроскопом при увеличении в 400 раз

3. Результаты исследований

3.1 Накопление свинца и кадмия в органах крыс

При исследовании наличия химических веществ в биологических объектах, прежде всего, необходимо изучить накопление и распределение их в организме. Это необходимо для того, чтобы можно было судить о материальной кумуляции токсикоэлементов в организме и установлении органа накопителя. Изучение накопления и распределения свинца и кадмия в организме дает возможность проведения корреляции между патологическим процессом в органах, содержанием токсикоэлементов в них и изменением биологических показателей в крови животных.

Скорость всасывания соединений тяжелых металлов, их распределение и токсичность зависит не только от биологических особенностей органов пищеварения, а так же физико–химических свойств всасываемых веществ, взаимодействие их с компонентами пищи и от присутствия в кормах различных добавок.

Как известно, содержание протеина в рационе влияет на всасывание токсикоэлементов в организме животных.

В ходе исследований было установлено, что больше всего свинца накапливается в органах крыс, причем больше всего он накапливается в почках и составляет 11,85 ± 0,12 мг/кг. Если сравнивать с контрольной группой, то содержание свинца увеличивается в 24 раза (Р<0,001).

В печени уровень свинца увеличивается в 15 раза, а в сердце 13 раз и составляет – 7,58 ± 0,67 мг/кг и 5,61 ± 0,47 мг/кг соответственно.

При поступлении в организм крыс соединения кадмия на протяжении двух недель, его уровень также больше всего увеличивается в органах крыс.

Содержание токсикоэлемента составляет: в почках – 0,94 ± 0,21 мг/кг, в печени – 0,71 ± 0,62 мг/кг и в сердце –0,75 ± 0,32 мг/кг, т.е. это количество больше, чем в контрольной группе: в почках в 35,7 (Р<0,001), в печени – 23 раза (Р<0,001) и в сердце – в 28 раз (Р<0,01).

Таблица 1. Содержание свинца и кадмии в органах крыс.

3.2 Биохимические показатели сыворотки крови крыс