6. Лабораторная диагностика.

Лабораторная диагностика туберкулеза включает, бактериологический и батериоскопический методы исследования, проведения биологической и аллергической реакции. Предложены также серологические реакции, но практического применения не нашли.

Материалом для микроскопического, бактериологического исследований и биопробы, в зависимости от локализации процесса, служат, гной, спиномозговая жидкость, моча, испражнения, которые собирают в стерильную посуду ( мокроту в баночки, спинномозговую жидкость и другие материалы в пробирки).

Метод гомогенизации. Суточную порцию мокроты выливают во флакон или банку, добавляют равный объем 1% водного раствора едкого натрия, плотно закрывают резиновой пробкой и энергично встряхивают до полной гомогенизации ( 10-15 мин.). Мокроту, утратившую вязкость, центрифугируют, жидкость сливают, осадок нейтрализуют добавлением 2-3 капель 10% раствора соляной или 30% раствора уксусной кислоты. Из осадка готовят мазки и окрашивают по Цилю-нильсену.

Метод Флотации. Суточную или двухсуточную порцию мокроты гомогенизируют обычным способом. Для того чтобы не осталось слизистых комочков, банку с гомогенизированной мокротой помещают на 30 минут в водяную баню при 55 градусах. Затем добавляют 1-2 мл. ксилола ( можно вместо ксилола добавить бензол, бензин и т.п.) и встряхивают в течении 10 минут, а затем отстаивают 20 минут при комнатной температуре. Капельки ксилола с адсорбированными микробами всплывают, образуя сливно-образный слой, его снимают пипеткой и наносят на предметное стекло, помещенное на стеклянную пластинку, нагретую над водяной баней до 60 градусов. Высохший мазок покрывают новой порцией сливкообразного слоя, и так до тех пор, пока будет перенесен на стекло весь флотационный слой. Препарат фиксируют и окрашивают по Цилю-Нильсену.

Бактериологический метод является более эффективным и применяется в тех случаях, когда бактериоскопическое исследование не дало положительных результатов.

К исследуемому материалу добавляют двойной объем 6% раствора серной кислоты, встряхивают в течении 10 минут. Затем центрифугируют в стерильной пробирке, жидкость сливают, осадок нейтрализуют добавлением 1-2 капель 3% раствора едкого натрия или отмывают несколько раз изотоническим раствором и сеют. Фекалии обрабатывают 4% раствором едкого натрия, смесь помещают в термостат на 3 часа, центрифугируют и осадок нейтрализуют 8% раствором соляной кислоты, после чего сеют в специальные среды:

1) Глицериновый картофель по Павловскому.

2) Среда Петраньяны.

3) Синтетическая среда Сотона.

Также материалы, как спинномозговая жидкость, экссудат, гной, кровь предварительной обработке не подвергается, их наносят пипеткой на питательную среду, затем платиновой петлей тщательно втирают, распределяя по всей поверхности среды. Ватные пробки заливают парафином, посевы помещают в термостат при 37 градусах и выдерживают в течении 6-8 недель. Рост появляется на 10-30-й день в виде отдельных колоний, значительно возвышающихся над поверхностью среды, морщинистых, суховатых, с неровными краями.

Ускоренные методы бактериологической

диагностики туберкулеза.

Глубинный рост в гемолизированной крови. В пробирки с цитратной кровью сеют те же выделения, обработанные серной кислотой и промытые изотоническим раствором. Через 6-8 дней пребывания в термостате среду центрифугируют и из осадка делают мазки.

Аллергический метод применяют главным образом для определения инфицирования микобактериями туберкулеза Положительная аллергическая реакция на введение туберкулина подтверждает заражение туберкулезом, но не характер процесса. Эту реакцию применяют в диагностике туберкулеза у детей, кроме того, перед вакцинацией наряду с клиническими исследованиями ставят обязательно и аллергические реакции: кожную пробу Пирке и внутрикожную Манту.

Серологический метод. Реакцию связывания комплемента Барде-Жангу для диагностики применяют редко.

В настоящее время в качестве быстрой диагностики туберкулеза применяют люминесцентную микроскопию. Этот метод увеличивает количество положительных результатов. Препарат окрашивают ауромином в разведении 1:1000, после чего обесцвечивают соляно кислым спиртом и докрашивают кислым фуксином, который ‘’ гасит’’ свечение элементов тканей, слизи в препарате. Микобактерии туберкулеза светятся золотисто зеленым светом на темном фоне.