§ Специфические (трепонемные) реакции – реакция иммобилизации бледных трепонем (РИЬП) и реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Указанные реакции имеют различную чувствительность специфичность и рекомендованы к применению в зависимости от поставлено задачи.

При массовых профилактических обследованиях населения на сифилис применяется микрореакция преципитации (МП) (микрореакция на стеле, или экспресметод диагностики сифилиса) с плазмой крови или инактивированной сыворотки крови обследуемых. Эта реакция становится со специальным кардиолипиновым антигеном. Результаты реакции оцениваются качественно как 4+, 3+, 2+ и отрицательные. Преимущество экспресс метода заключается в быстроте получения ответа (через 30-40 минут), небольшом объеме необходимой для анализа крови (2-3 капли плазмы), которую можно брать у пациентов из пальца.

С помощью этого экспресс –метода обследуются также лица, подлежащие периодическим медицинским осмотрам на венерические болезни. Если экспресс – метод применяется изолировано, то он является лишь отборочным тестом.

На основании его диагноз сифилис не устанавливают, а обследуемых направляют к дерматовенерологу ля дальнейшего клинического обследования и исследования их крови с помощью УСР, РИБТ, РИФ. Экспресс –метод не применяют у беременных, доноров в связи с тем, что часто дает ложноположительные результаты. Средние медицинские работники, прошедшие специальную подготовку, производят взятие крови из пальца и постановку МП. Учитывать ее результаты обязаны врачи – лаборанты.

Реакции связывания комплемента.

С трепонемным и кардиолипиновым антигенами применяются для подтверждения диагноза сифилиса при наличии активных проявлений болезни, для обследования лиц, бывших в пловом контакте с больным сифилисом, выявления латентного (скрытого) сифилиса, эффективности проводимой терапии. При обследовании больных психиатрических и неврологических стационаров. Доноров и беременных, включая лиц, направляемых на искусственное прерывание беременности.

Кровь для исследования берут в количестве 5-7 мл из локтевой вены стерильной иглой. У грудных детей кровь берут из височной вены или из надрезов на пятке.

Взятие крови производят строго натощак. И оставляют ее в чистых сухих пробирках на 2-3 ч при комнатной температуре для свертывания. Постановку КСР и специфических реакций производят в серологических лабораториях кожно-венерологических учреждений.

Принцип РСК заключается в том, что реагины, находящиеся в сыворотке крови больных сифилисом, обладают свойством вступать в соединенеия с различными антигенами. Образовавшиеся комплексы сортируют введенный в реакцию комплемент. Для индикации комплекса реагины – антиген – комплемент используется гемолитическая система (смесь эритроцитов барана с гемолитической сывороткой).

При наличии комплекса эритроциты выпадают в осадок. Что заметно не вооруженынм глазом. Выраженность гемолиза обозначается врачом ключами: резко положительная 4+, положительная 3+, слабоположительная 2+ ли 1+ и отрицательная. Кроме качественной оценки этих реакций имеется и количественная, имеющая значение в диагностике некоторых стадий сифилиса и при контроле за эффективностью терапии.

Впервые для серологической диагностики сифилиса этот принцип был введен в 1906 г. Вассерманом, Нейссером и Бруком. В качестве антигена применялся водный экстракт печени. В последующем реакцию Вассермана начали ставить и с другими антигенами, что сделало ее более чувствительной. В настоящее время в качестве антигенов рекомендовано применять кордилипиловый антиген (экстракт из сердца быка, обогащенный холестерином и лецитином) и трипонемный антиген (обработанная ультразвуком взвесь апатогенных культуральных трепонем).

Реакция связывания комплемента с кардиолипиновым и трепонемным антигенами становится положительной через 2-4 недели постепенно нарастает и достигает максимума (1:160 – 1:320 и выше) при вторичном свежем сифилисе.

Затем титр реагинов постепенно падает и при вторичном рецидивном сифилисе обычно не превышает 1:180 -1:120. среди больных с третичным сифилисом указанные реакции дают положительный результат только у 70%.

Следует подчеркнуть, что КСР не являются строго специфичным для сифилиса и в ряде случае в может давать ложноположительные (неспецифические) результаты, они могут получаться в связи с техническими ошибками (полный гемолиз, нестерильное взятие крови, недостаточная квалификация лаборантов). Ложные реакции наблюдаются у больных лепрой, малярии, иногда с ситуационными заболеваниями, новообразованиями, туберкуле, заболеваниями печени, при приеме лекарственных препаратов, а также во время беременности. При менструациях и т.д. Не рекомендуется исследовать кровь в течение первой недели после вакцинации, травм, хирургических вмешательств, при лихорадочных состояниях в течение первых 2 –х недель после родов, у новорожденных в первые 10 дней жизни, т.к. физико-химические изменения в сыворотке крови при этих состояниях могут быть сходы с теми, которые наблюдаются у больных сифилисом.

Для дифференцирования ложноположительных результатов КСР от истинных для диагностики скрытых и поздних форм, сифилиса, при подозрении на сифилитическую инфекцию, для установления ретроспективного диагноза заболевания в нашей стране рекомендуется, применять специфические серологические реакции (РИБТ и РИФ).

Для проведения специфических серологических реакций кровь в количестве 5-10 мл берут также из локтевой вены натощак. Шприц и иглу после стерилизации промывают изотоническим раствором хлорида натрия, и кровь вливают в сухую пробирку для исследования на РИФ и в стерильную пробирку для исследования на РИБТ. Постановка специфических серологических реакций на сифилис производится в специализированных лабораториях кожно-венерологических учреждений.

РИФ основана на непрямом методе определения флюоресцирующих антител. Антигеном в этой реакции служит взвесь убитых культурных бледных трепонем, фиксированная к предметным стеклам на которые наносят исследуемую и антивидовую флюоресцирующую сыворотки. Результаты РИФ определяют под люминесцентным микроскопом путем оценки свечения трепонем в препарате. При положительном результате трепонемы имеют желтовато-зеленое свечение, степень которого, обозначают плюсами от 1+ до 4+, при отрицательных результатах трепонемы не светятся.

РИФ в настоящее время ставят в нескольких модификациях (РИФ –abs, РИФ – 200).

Другая специфическая реакция на сифилис – РИБТ, предложенная в 1949 г. Р. Нельсоном и М. Мейером, основана на феномене обездвиживания бледных трепонем антигенами сыворотки крови больного в присутствии комплемента.

В качестве антигена для РИБТ используют взвесь бледных живых трепонем, полученных от зараженных сифилисом кроликов. Подсчет утративших подвижность (иммобилизированных) трепонем ведут под микроскопом. Результаты реакций оценивают в процентах от 0 до 20% – отрицательный, от 21 до 31% - сомнительная, от 31 до 50% - слабоположительная, от 51 до 100% - положительная.