Политенные хромосомы.

Наличие политенных хромосом является одной из причин популярности дрозофилы как объекта изучения. Политенные хромосомы были впервые обнаружены в клетках слюнных желёз дрозофилы в 1934 г. Личинка во время роста имеет постоянное количество клеток, но в то же время ей необходимо накапливать генетический материал для будущего развития. В результате клетки увеличиваются в рвзмерах, и каждая хромосома реплицируется сотни раз, при этом все цепочки ДНК остаются прикреплёнными одна к другой до тех пор, пока их не наберётся несколько тысяч, лежащих бок о бок. Таким образом, образуется толстая, бросающаяся в глаза своею величиной и легко различимая в микроскоп политенная хромосома. Более того, после окрашивания эти хромосомы имеют чередующиеся тёмные и светлые полоски, индивидуальные по строению для каждой части хромосомы, так что можно определить, какая часть хромосомы попала в объектив микроскопа.

Стандартная карта политенной хромосомы разделяет геном на 102 пронумерованные полоски (1-20 - X-хромосома, 21-60 - вторая хромосома, 61-100 - третья и 101-102 - четвёртая); каждая из полосок поделена на 6 буквенных полосок (A-F), и каждая из пронумерованных полосок также поделена на несколько (до 13) подразделов. На фотографии выше указана 57-я полоска. Локализация многих генов известна точно по буквенной шкале, но не точно по цифровой шкале, и поэтому указывается приблизительно (например, 42C7-9, 60A1-2). Политенные полоски не имеют одинаковой длины последовательности нуклеотидов, но в среднем одна буквенная полоска содержит около 300kb ДНК, или 15-25 генов.

Постановка опыта.

Инвентарь и оборудование, использованное нами в работе.

1. Птичье пёрышко,

2. Листок чистой белой бумаги (или молочно-белое стекло)

3. Лупы двух различных типов

4. Капельница для серного эфира

5. Морилка

6. Пробки из ваты

7. Пробирки с питательной средой

8. Этикетки, клей, и т. д.

Питательная среда.

Нами была использована питательная среда, приготовленная из дрожжей, сахара, манной крупы, пропионовой кислоты, воды и агар-агара.

Важно, чтобы среда не была слишком твёрдой, т.к. молодые личинки не могут проникнуть вглубь твёрдой среды и погибают, и не слишком жидкой, т.к. в жидкой среде могут погибнуть отложенные яйца.

Наркотизация мух.

Анализ и подсчёт мух, а также отбор девственных самок и подбор родительских пар для скрещивания проводят на матово-белом стекле под лупой после того, как их усыпят серным эфиром. Для этой цели их обычно помещают в эфиризатор или морилку. В нижней части морилки имеется углубление, в которое вставлен плотный ватный тампончик, смачиваемый из капельницы по мере надобности 1-2 каплями серного эфира. Стаканчик с мухами осторожно постукивают о ладонь, мухи при этом собираются в нижней его части, затем осторожно снимают ватную пробку, накрывают стаканчик эфиризатором и опрокидывают так, чтобы стаканчик с мухами был наверху. Легким постукиванием о ладонь всех мух переводят в эфиризатор и закрывают его пробкой с ватным тампоном, смоченным 1-2 каплями эфира. Как только все мухи заснут, их осторожно вытряхивают из эфиризатора на молочно-белое стекло и, пользуясь лупой и птичьим пёрышком, быстро анализируют и подсчитывают, так как в наркотизированном состоянии они могут находиться только около 5 минут. Если наркотизацию необходимо продлить, мух накрывают большим часовым стеклом, под которое кладут ватный тампон, смоченный одной каплей эфира. Если эти мухи нужны для последующего размножения, их помещают в чистые пробирки с питательной средой. В одну пробирку для размножения следует помещать 2-3 самок и 3-5 самцов. Для того чтобы сонные мухи не упали на дно пробирки и не увязли в питательной среде, их помещают на чистые стенки стаканчика со средой и держат стаканчик в горизонтальном положении до тех пор, пока мухи не проснутся.

По окончании работы с мухами их усыпляют и выбрасывают. От большой дозы эфира мухи погибают через 3-5 минут. Об их гибели можно заключить по растопыренным кверху и в стороны крыльям и безжизненно вытянутым лапкам. Всю работу с дрозофилой и результаты наблюдений фиксируют в соответствующем журнале. Оптимальными условиями для успешного размножения мух является температура 24-26° С, относительная влажность 70-80%, хорошая аэрация.