Приготовление препаратов

1. Приготовление препарата. На середину чистого предметного стекла наносили каплю мясопептонного бульона. В неё вводили немного микроорганизмов, взятых с питательной среды кончиком стерильной бактериологической петли и тщательно перемешивали. Полученную суспензию равномерно распределяли тонким слоем по поверхности предметного стекла на площади 2-3 кв. см. Из носовой полости мазок брали ватным тампоном и переносили на предметное стекло.

2. Полученный мазок высушивали в токе тёплого воздуха над небольшим пламенем газовой горелки, не допуская нагревания стекла. Стекло держали мазком вверх.

3. Фиксация мазка. Стекло с сухим мазком провели 3-4 раза над пламенем газовой горелки, слегка прикасаясь к пламени той стороной стекла, где мазок отсутствовал. Фиксация имеет цель убить клетки и закрепить мазок (зафиксировать) на стекле. Мёртвые клетки прокрашиваются лучше, чем живые.

4. Окрасили мазок по Ревигеру (приготовление: 10-20 гр. краски генциан-виолета влить в раствор 40 процентного формалина, который составляет 100гр.). Выдерживали мазок 15 секунд, затем промыли и высушили фильтровальной бумагой.

Картофель содержит 5 – 13 % азотистых веществ, около 75% углеводов (на сухое вещество), богат калийными и фосфорными солями и содержит дополнительные питательные вещества.

Для приготовления варёного картофеля выбирают отборные клубни. Их тщательно моют, удаляют глазки, шелуху и все повреждённые места. Затем снова моют, очищенные клубни режут на куски толщиною 0,5 – 0,75см. натирают мелом, если засеваемый микроб образует кислоту, и укладывают в чашки на 1 – 2 слоя кружков фильтровальной бумаги, стерилизуют при атмосфере 30 минут. На поверхности картофеля многие микроорганизмы дают характерный рост и образуют пигменты.

Выращивали микроорганизмы в чашках Петри. В качестве питательной среды использовали варёный картофель.

Микроскопирование проводили в республиканской микробиологической лаборатории. Помогала нам врач – бактериолог Залевская Тамила Григорьевна.

Проведенные опыты

№1. В чашку Петри положили три ломтика варёного картофеля и прикоснулись к нему немытыми руками.

№2. В чашку Петри положили три кусочка варёного картофеля и прикоснулись к нему тщательно вымытыми руками.

№3. Уголком сложенной чистой бумаги сняли зубной налёт и нанесли на питательную среду.

№4. Уголком сложенной чистой бумаги сняли зубной налёт, на уже предварительно чистые зубы.

№5. Вычистили грязь из ногтей и нанесли на питательную среду.

№6. На спичку намотали вату. Вату смочили слюной и, и таким образом нанесли слюну на питательную среду.

№7. Исследовали воздух в кабинете. Чашку Петри с ломтиками варёного картофеля оставили на 10 минут открытой в кабинете биологии, затем закрыли.

№8. Исследовали воздух на улице. Чашку Петри с ломтиками варёного картофеля вынесли открытую на улицу на 10 минут, затем закрыли. Крышки чашек Петри в опытах №7 и №8 держали краями вниз.

№9. К варёным ломтикам картофеля прилаживали монеты.

№10. К варёному картофелю прижимали несколько раз шариковую ручку боковыми сторонами, то есть той стороной, которой держали руками.

№11. В чашку Петри поместили ломтик варёного картофеля, а рядом положили кусочек бумаги. Чашку Петри держали открытой некоторое время, кроме того, прикладывали монету и руки.

№12. В чашку Петри поместили ломтик варёного картофеля, а рядом положили Х/б ткань. Чашку Петри некоторое время держали открытой.

№13. В чашку Петри поместили кусочек варёного картофеля, а рядом положили синтетическую ткань. Чашку Петри некоторое время держали открытой.

№14. В чашку Петри поместили кусочек варёного картофеля, а рядом положили смоченную водой вату. Чашку Петри некоторое время держали открытой.

№15. В чашку Петри поместили кусочек варёного картофеля, а рядом положили губку. Чашку Петри некоторое время держали открытой. В опытах №11, №12, №13, №14 и №15, после того как на картофеле появились микроорганизмы, перенесли их на необычную среду.

№16. В чашку Петри поместили кусочек варёного картофеля, кусочек ткани, вату и губку. Оставили открытыми на воздухе в течение 15 минут.

№17. В чашку Петри поместили варёный картофель, кусочек ткани, вату и губку, которым прикасались руками (на 15 минут оставили на воздухе).

№18. В чашку Петри поместили кусочек варёного картофеля, кусочек ткани, вату и губку, но ко всему тщательно прикладывали монету. Опыты №16, №17 и №18 проводились в осеннее время при пониженных температурах.

№19. Эксперименты проводили в лаборатории микробиологии при участии врача-микробиолога. Взяли мазок из носовой полости человека.

Микроскопирование

Микропрепараты рассматривали с помощью бинокулярного микроскопа, дающего увеличение в 900 раз с использованием иммерсии.

Результаты работы

Нами были обнаружены: 1) бактерии, 2) плесневые грибы, 3) актиномицеты. Таблицы прилагаются.

1) Бактерии: кокки, стафилококки, и палочковидние бактерии были обнаружены на руках, в зубном налёте и слюне.

Кокки – шаровидные бактерии. Микрококки – одиночные, диплококки – располагаются попарно, тетракокки – сочетание 4-х клеток, сарациты – 8-16 клеток. Стафилококки – располагаются без определённого порядка в виде гроздьев.

Палочковидные бактерии имеют цилиндрическую форму. Располагаются одиночно, иногда соединяются попарно или в виде цепочки.

2) Плесневые грибы: аспергилл, мукор, пигментообразующие грибки и их споры обнаружены фактически везде: в воздухе, в зубном налёте, под ногтями, на руках, на монете и на шариковой ручке.

Аспергилл имеет многоклеточный мицелий с межклеточными перегородками в гифах. Споро носящая гифа на верхнем конце имеет утолщение, несущее на себе палочковидные выросты – стеригмы, от которых отшнуриваются цепочки спор – конидий.

Мукор имеет ветвистый мицелий, состоящий из одной сильно разветвлённой клетки, от которой обособляются плодоносящие воздушные гифы с мешком – спорангием в виде головке на верху.

3) Актиномицеты или лучистые грибы – низшие одноклеточные организмы. Обнаружены в воздухе, в зубном налёте и под ногтями. У актиномицетов, выращенных на плотных питательных средах, различают три типа мицелия: субстратный, надсубстратный и воздушный.

Субстратный мицелий развивается в глубине питательной среды, его нити всасывают питательные вещества и доставляют их колонии – надсубстратному мицелию, а оттуда в воздушный мицелий.

Надсубстратный мицелий развивается на поверхности питательной среды, разрастается плотным сплетением в колонии большей или меньшей величины.

Воздушный мицелий формирует пушистую, бархатистую или мучнистую массу. Нередко воздушный мицелий развивается слабо в виде небольшого налёта, а некоторые актиномицеты и вовсе лишены его.

Выводы

1. Из микроорганизмов наиболее распространенными являются плесневелые грибы, особенно аспергилл. Их споры встречаются везде. При попадании на питательную среду через некоторое время может покрыть весь субстрат.