Рис. 6. Способ графической обработки элюентной хроматограммы

Для идентификации веществ по хроматограмме обычно используют стандартные образцы или чистые вещества, сравнивая время удерживания неизвестного вещества tх с временем удерживания известного вещества tст.

Площадь пика S пропорциональна количеству вещества в смеси, поэтому S используют в количественном анализе. В некоторых случаях, когда хроматограмма состоит из узких пиков, допускается использовать для количественного анализа высоту пика h. Площадь пика измеряют различными способами, например графическим (как площадь треугольника) или планиметром, взвешиванием вырезанных пиков. В современных хроматографах для этой цели предусмотрен электронный интегратор. Автоматизация хроматографического анализа с помощью персональных компьютеров позволила значительно усовершенствовать идентификацию и количественную обработку хроматограмм.

Содержание i - того компонента в смеси по хроматограмме находят одним из методов:

1) методом абсолютной калибровки, т.е. по градуировочному графику зависимости типа S или h от содержания (в г) i-того компонента;

2) методом внутреннего стандарта, когда в анализируемую смесь неизвестного количественного состава вводят известное количество не содержащегося в ней вещества - внутреннего стандарта. Внутренний стандарт должен быть инертен к компонентам исследуемой смеси, а его физико-химические свойства должны быть близки им.

Содержание i-того компонента смеси (в %) находят по формуле

или ,

где r - отношение массы внутреннего стандарта к массе анализируемого вещества;

методом нормировки, заключающимся в том, что сумму площадей (высот) всех пиков на хроматограмме смеси принимают за 100%.

Содержание i-того компонента находят по формуле

или .

В процессе движения по колонке зона вещества вследствие диффузии размывается, что сказывается на ширине пиков. Ширина пиков W равна основанию треугольника, образованного касательными к левой и правой ветвям пика. Ширина пиков определяется эффективностью хроматографической системы. В качестве меры размывания зоны используют параметр, имеющий размерность длины и называемый “высота, эквивалентная теоретической тарелке” (ВЭТТ),H: H= ,

где L - длина колонки; W - ширина пика.

При расчете Н значения W и tr необходимо брать одной размерности или в сек, или в мм.

В хроматографии, как и в дистилляции, используют параметр - число теоретических тарелок:

N = = 16 .

Чем меньше ВЭТТ, тем уже пик, тем эффективнее система, тем большее количество компонентов можно разделить на колонке. Полнота разделения и правильность определения зависят от того, насколько отделены пики друг от друга. Желательно, чтобы они не перекрывались, в то же время расстояние между ними не должно быть очень большим, так как это замедляет анализ. Для характеристики полноты разделения пиков служит величина, называемая разрешением:

или при WAWB RS = .

При RS < 0,8 разрешение пиков как правило неудовлетворительное, при RS = 1 перекрывание составляет около 2% и лишь при RS=1,5 можно считать, что оба вещества разделены полностью. Значение RS=1,5 является оптимальным для симметричных пиков. Если пики асимметричны, то оптимальное значение RS должно быть больше 1,5. Для расчета RS по хроматограмме необходимо графически определить ряд параметров (рис. 2.6. 7).