Приготовление раствора Драбкина, на 1 л реактива берут:

Бикарбонат натрия - 1 г, красная кровяная соль

- 0,2 г, цианистый калий или натрий - 0,05 г, дистиллированная вода

-остальной объем.

4.2.2. Оборудование и реактивы:

- фотоэлектроколориметр (ФЭК) или спектротометр с зеленым светофильтром и кюветами толщиной 1 см;

- химические пробирки с пробками;

- капиллярная пипетка от гсмометра Сали объемом 20 мкл;

- градуированная пипетка на 5 мл;

- раствор Драбкина.

4 2.3. Ход определения и учет результатов.

Мерной пипеткой в пробирку наливают 5 мл трансформирующего раствора Драбкина. Пипеткой от гемометра Сали добавляют 20 мкл крови. Содержимое пробирки хорошо перемешивают и оставляют в холодильнике на 20 минут. По истечению этого времени рабочий и трансформирующий растворы наливают в кюветы и, используя зеленый светофильтр, проводят измерения на ФЭКе. Расчет концентрации гемоглобина (г/л) на основе данного определения проводят по формуле:

x=d540 x 367,1 г/л,

где: d 540 - показания ФЭК; 367,1 - коэффициент пересчета, учитывающий разведение крови, миллимолярный вес гемоглобина и другие показатели.

5. Определение гематокритной величины

Гематокритное число - это отношение объема эритроцитов к общему объему крови, выраженное в л/л (1 л/л равен 100 %).

5.1. Подготовка к исследованию.

Приготовление растворов антикоагулянта:

- раствор Геллера и Пауля:

- на 100 мл воды: щавелевокислый аммоний - ],2 г, щавелевокислый калий - 0,8 г;

- 5 % раствор трсхзамсщенного лимоннокислого натрия.

5.2. Оборудование и реактивы:

- микрокапилляры,

- центрифуга, при массовом отборе проб удобнее использовать спе циальную центрифугу МГЦ - 8,

- растворы антикоагулянтов: раствор гепарина 1000 ЕД/мл или 7,7 мг/мл, или раствор Геллера и Пауля, или 5% раствор лимоннокислого натрия.

5.3. Ход определения и учет результатов.

Микрокапилляры предварительно обрабатывают одним из растворов антикоагулянта. Можно несколько раз сполоснуть их раствором гепарина и высушить при комнатной температуре или же в капилляры насасывают на 1/10 часть раствора Геллера и Пауля и высушивают в сушильном шкафу при 60°С. В подготовленные таким образом капилляры набирают кровь. Конец капилляра закупоривают с помощью замазки и ставят центрифугировать до получения постоянного объема эритроцитов. Время цснтри4)угирования зависит от скорости вращения центрифуги. Достигают эффекта полного осаждения эритроцитов. Отсчет объема эритроцитов и плазмы производят при помощи миллиметровой линейки. Процентное отношение столба эритроцитов к высоте всего столба крови является гематокритной величиной, которое переводят в размерность л/л.

6. Определение белка в сыворотке крови

Содержание белка в сыворотке крови рыб служит экспресс - тестом для определения уровня физиологического состояния рыб при выращивании в современных рыбоводных хозяйствах. Концентрацию белка выражают в г % или в г/л; 1 г/л равен 10 г %.

6.1. Оборудование и реактивы:

- уленгутки или небольшие пробирки,

- штатив,

- центрифуга,

- рефрактометр,

- пастеровские пипетки,

- спирт.

6.2. Ход определения и учет результатов

2-3 мл крови, полученной одним из методов (см. п.2.), помещают в подготовленные уленгутки или небольшие пробирки. После этого кровь центрифугируют 5 минут при 3000 об./мин. В случае отсутствия центрифуги проводят отстаивание крови в холодильнике 30 - 45 минут. Полученная после центрифугирования или отстаивания сыворотка отсасывается чистой пастеровской пипеткой и несколько се капель помещают на пластинку рефрактометра. Регистрируют показатель преломления по его шкале. По таблице 1, приведенной ниже, определяют содержаниебелка в сыворотке крови. После каждого исследования обе поверхности призм протирают марлевым тампоном, смоченным в спирте.

7. Определение числа эритроцитов пробирочным методом в камере Горяева Число эритроцитов (в млн. в 1 мкл) - важный показатель физиологического состояния рыб, который характеризует наличие анемии.

7.1. Подготовка к исследованию.

Приготовление раствора Хендрикса:

- сульфат натрия - 20 г, хлористый натрий - 5 г, цитрат натрия трехзамещенный - 3 г, ледяная уксусная кислота - 100 мл, вода дистиллированная до 1 ()()() мл.

7.2. Оборудование и реактивы;

- химические пробирки с пробками,

- градуированная пипетка на 5 мл,

- капиллярная пипетка от гемометра Сали,

- пастеровская пипетка,

- камера Горяева,

- микроскоп,

- раствор Хендрикса.

7.3. Ход определения и учет результатов

Градуированной пипеткой в химическую пробирку наливают 4 мл раствора Хендрикса. В капиллярную пипетку от гемометра Сали набирают кровь до метки 20 мкл и выдувают в пробирку, осторожно промывая капилляр несколько раз. Покровное стекло притирают к камере Горяева до появления ньютоновских колец. Содержимое пробирки тщательно перемешивают и пастеровской пипеткой заполняют камеру Горяева. Через 1-2 минуты начинают подсчет числа эритроцитов под микроскопом в 5 больших или 80 малых квадратах, расположенных по диагонали. Для определения количества эритроцитов в 1 мкл достаточно умножить полученное при подсчете число эритроцитов на 10000.

Таблица 1

Концентрация белка (в г %) при различном показателе преломления*