Подсчет эритроцитов в счетной камере.

При подсчете эритроцитов использовали счетную камеру Горяева. Перед заполнением камеры ее и покровное шлифовальное стекло мыли дистиллированной водой, протирали спиртом и насухо вытирали. Затем шлифовальное стекло притирали так, чтобы появились радужные кольца.

Кровь разводят в пробирках Флоринского. Для этого в сухую пробирку наливали 4 мл 3%-ного раствора хлорида натрия. Капиллярной пипеткой набирали 0,02 мл крови и выдували ее в пробирку с раствором хлорида натрия. Пробирку закрывали резиновой пробкой и тщательно перемешивали.

После этого пипеткой или концом стеклянной палочки отбирали из пробирки каплю крови и заполняли камеру так, чтобы вся поверхность, на которую нанесена сетка, была заполнена жидкостью без затекания ее в бороздки и без образования пузырьков воздуха. После этого, выждав 1-2 минуты, подсчитывали эритроциты под малым увеличением микроскопа в 5 больших квадратах, расположенных по диагонали, начиная в левом верхнем, большом квадрате, разделенном на 16 маленьких квадратиков.

Количество эритроцитов определяли по формуле:

Х=А*4000*В : Б,

где, Х- количество эритроцитов, сосчитанных в 1 мкл крови;

А- количество эритроцитов, сосчитанных в 5 больших квадратах;

Б- количество малых квадратиков в 5 больших (5*16=80)

В- степень разведения крови (200 или 100)

4000- коэффициент, характеризующий объем жидкости над 1 маленьким квадратиком.

Определение среднего содержания гемоглобина в одном эритроците.

Среднее содержание гемоглобина в одном эритроците рассчитывается путем деления концентрации гемоглобина на число эритроцитов в 1мл крови Гемоглобин в г/л : число эритроцитов в миллионах.

Определение цветового показателя.

Цветовой показатель вычисляется по формуле:

Гемоглобин в г%*6: количество эритроцитов (две первые цифры в миллионах).

Подсчет лейкоцитов в счетной камере Гаряева.

В пробирку вносят 0,4 мл жидкости Тюрка. Микропипеткой набирали 0,02 мл крови, и вносят ее в пробирку с разбавителем. Содержимое пробирки хорошо смешивали, закрывали пробкой и оставляли на 4 минуты, при этом слегка встряхивали. Из этой пробирки с помощью пипетки берут 1-2 капли жидкости и вносят в счетную камеру Горяева. Лейкоциты считали в сетке Горяева под малым увеличением микроскопа в 100 больших нерасчерченных квадратах (1600 маленьких).

Расчет общего количества лейкоцитов проводят по формуле:

Х=А*4000*20 : 1600

где, Х- количество лейкоцитов в 1 мкл крови;

А- количество лейкоцитов в 100 больших квадратах;

4000- множитель перевода к объему в 1 мкл крови;

20- степень разведения крови;

1600- количество малых квадратов.

Определение скорости оседания эритроцитов по методу Панченкова.

В капилляр Панченкова мы набирали раствор цитрата натрия до метки «Р» и выливали на стекло. В этот же капилляр набирали кровь до метки «К». Из капилляра кровь выдували в каплю реактива, перемешивали. Снова набирали кровь в этот же капилляр и смешивали ее с каплей на стекле.

Наклонив стекло, набирали цитратную кровь в тот же капилляр до метки «О» и ставят в аппарат Панченкова под углом 90°. В течение часа эритроциты оседали и над ними в капилляре образуется столбик светло- желтой плазмы. Отмечали его высоту, отсчитывая количество миллиметров сверху вниз.

Техника приготовления и окраска мазков крови.

Предметное стекло промывали водопроводной водой, затем протирали ватой смоченной спиртом. В момент нанесения капли крови на сухое предметное стекло, его удерживали за узкие края между большим и указательным пальцами одной руки. Каплю, крови величиной с небольшую горошину наносят на предметное стекло, отступая от узкого края на 0,5-1 см. В другую руку берут шлифованное стекло так, чтобы большой и указательный пальцы выступали за край. Приставляли узким краем к стеклу с кровью слева от капли под углом 45° и продвигали его вправо до соприкосновения с кровью. Быстрым движением ведут шлифовальное стекло справа налево к большому пальцу до тех пор, пока не будет исчерпана вся капля.

Перед окраской мазков готовим рабочий раствор краски Романовского, из расчета 2-3 капли на 1мл дистиллированной воды. Мазки крови кладем на стеклянные палочки или перекладины, помещенные в чаши Петри. Затем на них наносим толстым слоем раствор краски Романовского и окрашиваем 30 минут. После истечения указанного времени краску смывали струей дистиллированной воды и высушивали на воздухе.

Окрашенный и высушенный мазок крови исследовали под большим увеличением микроскопа с масляной иммерсией, с целью выявления морфологических свойств клеток крови и выведения лейкограммы.

2.2.2 Химическое исследование мочи.

Определение белка.

1. Проба с кипячением. В пробирку наливали 2-3 мл фильтрованной мочи и определяли ее реакцию. Если моча щелочная, то ее подкисляли 10% раствором уксусной кислоты, до слабокислой или нейтральной реакции. Над пламенем спиртовки пробу нагревали до кипячения. Помутнение мочи или появление осадка указывает на наличие белка.

2. Проба Роча. В пробирку наливали 2-3 мл фильтрованной мочи, добавляли по каплям 20% раствор сульфосалициловой кислоты. Появление мути, хлопьев или осадка указывает на присутствие в моче истинного белка.

3. Проба Геллера. В пробирку наливали 3-5 мл мочи и с помощью пипетки на мочу наслаивали 3-5 мл 20% раствора азотной кислоты. При наличии белка на границе двух жидкостей образуется мутное, белое кольцо различной толщины, которое зависит от наличия белка в моче. При незначительном содержании белка в моче, кольцо появляется через 2-3 минуты, после наслаивания.

Определение углеводов.

Проба Гейнеса. В одну пробирку наливали 1-1,5 мл свободной от белка мочи, в другую 1,5-2 мл реактива (13г сернокислой меди, 50г едкого калия, 15г глицерина, 1л дистиллированной воды). Обе жидкости нагревали до кипения, а затем реактив осторожно по стенке сливали под слой мочи. При наличии углеводов на границе двух жидкостей должно образоваться желтое или оранжевое кольцо. Если жидкости перемешать, все содержимое пробирки приобретет указанный цвет.

Определение кровяных пигментов.

Проба Тевенова - Ролянда. В пробирку наливали 1 мл не фильтрованной, предварительно перемешанной мочи и 1 мл реактива (50 г 5% раствора пирамидола в спирте, 50г 50% раствора уксусной кислоты) содержимое перемешивали и добавляли в пробирку 3-4 капли перекиси водорода. При наличие кровяных пигментов жидкость окрашивается в фиолетовый цвет. Если окраска сразу же не выступит, следует выждать 3-4 минуты.

Определение желчных, пигментов.

1. Проба Розина. На 4-5 мл исследуемой мочи наслаивали люголевский раствор (1г йода и 2 г калия йодистого на 300 мл дистиллированной воды) или 1% спиртовой раствор йода. При наличии в моче билирубина, на границе двух сред образуется зеленое кольцо.

Определение уробилина.

Проба Флоренца. В пробирку наливали 5 мл профильтрованной мочи и добавляли 3 капли крепкой серной кислоты, взбалтывали и приливали 4-5 мл эфира.

Пробирку закупоривали и несколько раз переворачивали. В другую пробирку наливали 2-3 мл соляной кислоты и по стенке приливали 1-2 мл эфирной вытяжки из 1й пробирки. При наличии уробилина должно образовываться красное кольцо на границе соляной кислоты и эфирной вытяжки.