Концентрированное извлечение сливают с головного перколятора со свежим растительным материалом. Все диффузоры последовательно становятся "хвостовыми" и "головными". Выход жидкого экстракта лопуха с одного перколятора состовляет 50 мл.

Остановочный период.

По окончании технологического процесса производства жидкого экстракта лопуха "хвостовые" перколяторы отключают, но новых перколяторов со свежим сырьем не включают. С каждого перколятора ежедневно сливают слабые извлечения, которые собирают отдельно и используют при последующих загрузках в производстве жидкого экстракта лопуха.

Полученные экстракты (1:1) в объеме 500 мл, изготовленные на 25 %, 40 % и 70 % этаноле, отстаивают 2 - 3 дня при 8 - 12° С, фильтруют и подвергают стандартизации по содержанию этанола, сухого остатка, тяжелых металлов (Новицкая С. Я., Борзунов Е. Е., Сафиулин Р. М., 1969)

2.2.2. Стандартизация жидких экстрактов листьев лопуха войлочного на 25, 40, 70 % этаноле

Описание: жидкость со специфическим запахом, горького вкуса. 25 % экстракт имеет окраску коричневого цвета с красноватым оттенком. У 40 % экстракта буро - коричневый цвет, 70 % экстракт темно - коричневого цвета.

2.2.2.1. Определение концентрации этанола в жидком экстракте листьев лопуха

В круглодонную колбу вместимостью 200 - 250 мл отмеривают точное количество экстракта. При содержании этанола выше 50 % отмеривают 25 мл жидкого экстракта, которые перед отгонкой разбавляют водой до 75 мл.

Для равномерного кипения в колбу с жидкостью помещают капилляры, пемзу или кусочки прокаленного фарфора.

Приемник (мерную колбу вместимостью 50 мл) помещают в сосуд с холодной водой, собирают около 48 мл отгона, доводят его температуру до 20 °С и добавляют воды до метки. Отгон должен быть прозрачным или слегка мутным.

Плотность отгона определяют денсиметром или с помощью пикнометра при температуре 20 °С и по алкоголиметрической таблице № ГФ XI находят соответствующее содержание этанола в процентах по объему.

Содержание этанола (X) в процентах по объему вычисляют по формуле:

Х = 50 * а / б,

где 50 - объем отгона в мл, а - содержание этанола в процентах по объему, б - объем исследуемого экстракта, взятый для отгона, мл.

2.2.2.2. Определение плотности жидкого экстракта

Чистый сухой пикнометр взвешивают с точностью до 0.0002 г, заполняют с помощью маленькой воронки очищенной водой немного выше метки, закрывают пробкой и выдерживают в течение 20 минут в термостате, в котором поддерживают постоянную температуру воды 20 °C с точностью до 0.1 °С. При этой температуре уровень воды в пикнометре доводят до метки, быстро отбирая излишек воды при помощи пипетки или свернутой в трубку полоской фильтровальной бумаги. Пикнометр снова закрывают пробкой и выдерживают в термостате еще 10 мин., проверяя положение мениска по отношению к метке. Затем пикнометр вынимают из термостата, фильтровальной бумагой вытирают внутреннюю поверхность горлышка пикнометра, а также весь пикнометр снаружи, оставляют под стеклом аналитических весов в течение 10 мин. и взвешивают с той же точностью.

Пикнометр освобождают от воды, высушивают, споласкивая последовательно этанолом и эфиром (сушить пикнометр путем нагревания не допускается), удаляют остатки эфира продуванием воздуха, заполняют пикнометр испытуемой жидкостью и затем производят те же операции, что и с очищенной водой.

Плотность Р (г / куб. см) вычисляют по формуле :

Р20 = [[(M2 - М) *0.99703] / (M1 - M)] + 0,0012, где

М - масса пустого пикнометра, г;M1 - масса пикнометра с очищенной водой, г; М2 - масса пикнометра с испытуемой жидкостью, г; 0.99703 - значение плотности воды при 20 °С и барометрическом давление 1011 гПа (760 мм рт. ст.)

2.2.2.3. Определение сухого остатка.

5 мл жидкого экстракта помещают во взвешенный бюкс, выпаривают на водяной бане и сушат 3 ч. при (102.5 ± 2.5) °С, затем охлаждают в эксикаторе 30 мин. и взвешивают.

2.2.2.4. Определение тяжелых металлов

К 1 мл жидкого экстракта или 1 г густого или сухого экстракта прибавляют 1 мл концентрированной серной кислоты, осторожно сжигают и прокаливают. Полученный остаток обрабатывают при нагревании 5 мл насыщенного раствора аммония ацетата. Фильтруют через беззольный фильтр, промывают 5 мл воды и доводят объем фильтрата до 200 мл 10 мл полученного раствора должны выдерживать испытания на тяжелые металлы (не более 0.01 % в препарате).

Результаты анализов по стандартизации жидких экстрактов лопуха войлочного на 25, 40, 70 % этаноле представлены в таблице № 5.

Таблица 5

Стандартизация жидких экстрактов листьев лопуха войлочного, изготовленных на 25 %, 40 % и 70 % этаноле

Вывод: жидкие экстракты на 25, 40, 70 % этаноле удовлетворяют требованиям ГФ XI.

2.3. Исследования противовоспалительных свойств сухих экстрактов листьев и корней, полученных на 25 %, 40 %, 70 % этаноле, сухого водного раствора извлеченног из листьев лопуха войлочного

2.3.1. Характеристика воспалительного процесса

Воспаление является защитно-приспособительной реакцией организма при различных повреждениях. Однако в ряде случаев восстановительные процессы переходят из нормальных в патологические и участвуют в формировании многих заболеваний. Воспалительный процесс - результат взаимодействия флогогенного начала и макроорганизма. Участие последнего зависит прежде всего от его реактивности, которая определяется состоянием регуляторных систем как высших, дистальных - нервной, эндокринной, иммунной, так и местных - физиологически активных веществ, выступающих в очаге воспаления в качестве медиаторов и модуляторов воспаления [Дыгай А.М., Клименко Н.А., 1992]. Большинство авторов в развитии воспаления выделяют следующие классические стадии: 1) повреждение тканей и клеток; 2) выделения медиаторов и реакция микроциркуляторного русла (сосудистая фаза); 3) проявления повышенной проницаемости - экссудации, миграции клеточных элементов (сосудисто-клеточная фаза); 4) пролиферация с последующей репарацией (фаза реконструкции) . При воздействии химического и физического раздражителя вслед за разрушением тканей (первичной альтерацией) происходит экссудация, затем - пролиферация и репарация, тогда как при действии биологических агентов процесс начинается чаще с экссудации, далее наступает расплавление тканей (вторичная альтерация) с последующей пролиферацией и репарацией. Вид воспаления зависит от причины, вызывавшей его, особенностей пораженной ткани, реактивности организма и др. На модели каррагенинового воспаления наблюдается три фазы выделения медиаторов: в первую фазу высвобождается гистамин и серотонин, во вторую - кинины. Простагландины являются посредником поздней фазы воспаления, развивающегося при каррагениновом отеке через 3 часа, максимум концентрации ПГЕ2 - через 12 - 24 часа. Активация этой третьей фазы воспаления зависит от включения в процесс системы комплемента [Чернух А.М., 1979]. Защитные реакции регулируются и нервно - гуморальными механизмами. В результате интеграции каскада реакций возникает комплекс сосудистых и клеточных реакций, характеризующих острое воспаление. При последующей ликвидации патогенетического агента развивается заключительная фаза воспалительного процесса - репарация, которая заканчивается заживлением дефектов ткани и прекращением реакций. Восстановительную (регенерационную) стадию воспаления лучше всего рассмотреть на модели заживления раневого повреждения, причем асептическая рана, в случае заживления первичным натяжением, имеет менее выраженную воспалительную реакцию, чем при заживлении вторичным натяжением [Фенчин К.М., 1979]. Для последнего характерно заживление раны вследствие выполнения дефекта грануляционной тканью, которая развивается в условиях открытого дефекта, она всегда соприкасается со внешней средой, будучи долго не покрытой эпителием, в то время как молодая соединительная ткань при первичном натяжении развивается под струпом или в условиях зашитой раны [Есипова И.К., 1966]. Если организм не способен удалить источник раздражения, то увеличивается выход в очаг воспаления полиморфноядерных лейкоцитов и выделение из них большого количества лизосомальных энзимов, вызывающих деструкцию тканей и развитие неспецифического хронического воспаления [Тринус Ф. П. и др., 1987]. В общем хроническое воспаление отличается тканевым ответом, характерным своей длительностью, развитием моноцитарного инфильтрата и пролиферацией соединительной ткани. Различают первичное хроническое воспаление и вторичное. Если повреждающий агент, вызывающий воспаление продолжает находиться в тканях, то развивается гранулема (гранулематозное воспаление). Развитие гранулемы является фазным: а) вокруг возбудителя образуется инфильтрат юных мононуклеарных фагоцитов; б) далее происходит созревание и скопление (агрегация) этих клеток с образованием зрелой гранулемы; в) дальнейшее созревание с формированием эпителиоидной гранулемы [Чернух А.М., 1979]. Развитие гранулемы происходит путем экссудации и пролиферации. Уже к 7 дням (а иногда и раньше) организуется зрелая гранулема (типа чужеродного тела). Существенное значение в патогенезе хронического воспаления принадлежит взаимодействию макрофагов и компонентов комплемента. На ранних этапах формирования гранулемы ведущая роль отводится метаболизму сульфатированных гликозаминогликанов.