TNF-L, ИЛ-1β и LFP были количественно опдсчитаны в среде, содержащей 1*106 прилипших фетальных Купфферовских клеток, обработанных 10мг/мл липополисахаридами в теечнии 24 час. Кроме того, нами проанализированно некоторые продукты очищенных фетальных гепатоцитов в надосадочной жидкости ИЛ-1β и TNF-L продуцировались ФКК человека в большем количестве после стимуляции липополисахаридами. Гепотоциты надосадочной жидкости содержали очень низкий уровень TNF-L и ИЛ-1β с наличием и отсутствием стимуляции липополисахаридами, указывая тем самым на минимальное заражение Купфферовских клеток. Наоборот, обработка липополисахаридами не повлияло на продукцию AFP гепатоцитами.

Временное направление ИЛ-1β и TNF-L, продуцируемых Купфферовскими клетками, обработанными липополисахаридами.

Количество ИЛ-1β и TNF-L, освобожденных в культуру супернатанта, было измерено энзимсвязывающим иммуносорбентным анализом. Увеличение продукции ИЛ-1β и TNF-L было обнаружено на ранних 2-ух часах после стимуляции липополисахаридами и максимальной продукция достигалась от 6 до 8 часов.

Эффект факторов роста и цитолинов на продукцию TNF-L Купфферовскими клетками:

Для определения других факторов потенциально активных в отношении Купфферовских клеток, мы подвергли инкубационному очищению клетки со специфическими факторами роста и интерлейкинами в течение 24 часов и измерили количество TNF-L, освобожденного в культуру супернатанта. ИЛ-1β и ИЛ-1L были способны стимулировать Купфферовские клетки в концентрации ≈1,0 нг/мл.

В некоторых научных докладах указывается, что ИЛ-6 может служить как медиатор для активности ИЛ-1 в определенных клеточных типах. Мы протестировали способность ИЛ-6 активировать ФКК. Купфферовские клетки могут быть стимулированы освободившимися TNF-L, когда происходит инкубация комбинации с ИЛ-6, TNF-β и интерфероном γ, но для этого потребовалась в 20-500 раз выше концентрации. Стимулирующий эффект для освобождения TNF-L был продемонстрировал для каждого интерлейкина или интерферона при определенной дозе. Уровень эндотоксина для каждого входящего в комбинацию фактора был определен < 0,2нг/10мг. Мы не смогли обнаружить любуб продукцию TNF-L после инкубации с эпидермальным фактором роста (200 нг/мл), фактором роста, полученным на чашках Петри (200 нг/мл), инсулин-подобным фактором роста II (200 нг/мл) или ИЛ-3 (200 нг/мл).

Комментарии: Исследования функциональных способностей человеческих фетальных Купфферовских клеток ограничены. Поэтому, наш интерес, в развитии человеческого плода и особенно в изучении функционирования печени плода, мы почувствовали, что для этого было важным развивать отдельные технологии для исследования и характеристики фетальных Купфферовских клеток. Мы представили здесь методы для изоляции Купфферовских клеток плода человека > 90% чистоты. Мы охарактеризовали морфологические особенности этих клеток, окрашивая L-нафтил ацетат эстеразой и иммунофлюоресцентным окрашиванием с мышиными моноклональными АТ, зная реакцию с человеческими макрофагами и моноцитами. Мы не полагаем, что препараты были загрязнены периферическими моноцитами < 0,5%, т.к. прилипшие клетки узнавались анти-Len-M1, а мышиные моноклональные АТ характеризовались реакцией с 90% циркулирующих человеческих моноцитов, но не с тканевыми микрофогами. Кроме того, < 1% наших прилипших клеток были узнаваемы 3 моноклональными АТ, что обнаруживает высокую плотность определенных человеческих Т-клеток.

На основании наших оценок ≈1%-2% клеток, представленных в печени плода человека 13-198 недель гестации, это Купфферовские клетки. Наши оценки подтверждаются окрашиванием L-нафтил ацетат эстеразой и иммунофлюоресцентным окрашиванием с мышиной моноклональными АТ 3С10 но замороженных срезах и препаратах интактной печени плода. Эти оценки соглазуются с результатами морфометрического анализа печени крыс в электронном микроскопе, который определил, что 2,1% объема печени была представлена Купфферовскими клетками. Кроме того, исследования демонтрируют, что все гематопоэтические клетки могут рассматриваться в качестве значительной пропорции от массы печени плода в течении 10-12 недель гестации; около 1-2% клеток были представлены макрофогами. При окрашивании замороженных тканевых срезов печени плода человека 10-20 недель гестации мышиными моноклональными АТ класса II, оценка позитивных клеток составила 0,3% и 7,7%. Некоторые различия в оценке количества Купфферовских клеток приписывают макрофагам в печени плода, выполняющей функцию их созревания. Эти находки указывают на развитие процесса созревания Купфферовских клеток в 10-20 недельный срок гестации и могут объяснить такие наши наблюдения, что 5% прилипших клеток не могут быть распознанными любыми моноклональными АТ против макрофагоф или моноцитов, использованных в этом исследовании.

Далее рассмотрим основные способы лечения и профилактики образования послеоперационных спаек у гинекологических больных.

При сравнительной оценке наиболее часто используемых адъювантов в профилактике послеоперационных спаек [4], маточных рога 30 крыс подвергались как разделению так и микрохирургическим анастомозам проксимальных сегментов рогов и разделению только дистальных сегментов. Крысы в ровной степени были разделены на 3 группы. Во 2-ой группе исследовался дексаметазом, в 3-ей группе – ибупрофен в качестве преоперативного и постоперативного способа профилактики спаек. Во время операции 5 крыс каждой группы орошались физиологическим раствором и другие 5 - 32% декстраном УО (гиксон). Анастома на левом маточном роге соединен У-О Викрилом, на правом маточном роге – У-О Дексоном. Во время повторной лапаротомии. 2 недели спустя, нитроперитонеальные спайки были классифицированы в соответствии с их выраженностью. Кусочки ткани были добыты из областей анастомозов и оценивались только гистологически. Общее количество спаек было 104 в первой группе; 53 для 2 группы (p<0.05) и 90 для 3 группы (p=0.7). Гистологическое исследование показало отсутствие различий между тремя группами. Воспалительная реакция ткани было наименьшей только в области разделения и наибольшей в участках анастомоза и наиболее ярко выражено вокруг хирургических швов. Отсутствие различий в плотности спаек или в гистологической оценке наблюдалось между левым и правым маточными рогами. Количество спаек было значительно меньше у животных, которым Гискон вводился нитроперитонеально (p<0,05), демонстрировала сходные воспалительные реакции. Эти результаты подтверждают, что нет значительных отличий между Дексоном и наложением викриловых швов, что дексаметпзон и Гискон эффективны в профилактике послеоперационных спаек и что воспалительная реакция тканей не изменяется данными адъювантами, но значительно увеличивается от присутствия и количества шовного материала.

Проведены научные исследования, доказавшие способность 1%, 2% и 3% растворов содакарбосиметилцеллюлозы (SCMC) значительно уменьшать образование послеоперационных спаек на хирургических моделях кроликов [5] при различных типах повреждения. Все животные, кроме 1, выжили с отсутствием признаков инфекции или кровотечения 14 дней спустя. Одно животное, пролеченное нитроперитонеальным введением гепаринизированного раствора Рингера, умерло во время выздоровительного периода и было удалено из исследования. Эффект SCMC был доза-зависимым и коэффициент корреляции составил 0,97. Ни декстран ни гепаринизированный раствор Вингера значительно (p≤0,05) не уменьшали спайки по сравнению с «сухим» контролем.